【摘要】：同種異體移植已在臨床廣泛開展，并成為根治許多終末期器官功能衰竭疾病的唯一手段。目前面臨的問(wèn)題是：人器官移植物來(lái)源十分有限，且獲得供體的時(shí)機(jī)極為隨機(jī)，，以至臨床需求缺口日益擴(kuò)大，并成為制約臨床開展移植術(shù)的主要因素。為解決供體器官嚴(yán)重短缺的難題，應(yīng)用異種動(dòng)物(主要是豬)為供體的異種移植成為近年移植免疫學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。 由于靈長(zhǎng)類動(dòng)物(包括人)體內(nèi)存在針對(duì)豬組織細(xì)胞表面α-半乳糖苷的天然抗體，故豬→人異種移植中，人天然抗體可與豬組織細(xì)胞表面抗原結(jié)合，通過(guò)激活補(bǔ)體而導(dǎo)致供者移植物細(xì)胞溶解，并引發(fā)超急性排斥反應(yīng)。國(guó)內(nèi)外均已報(bào)道：通過(guò)抑制受者補(bǔ)體系統(tǒng)激活等手段，可成功克服超急性異種移植排斥反應(yīng)。因此，異種移植后的急性血管性排斥反應(yīng)和急性細(xì)胞性排斥反應(yīng)成為人們關(guān)注的重點(diǎn)。目前有關(guān)異種移植的實(shí)驗(yàn)研究主要集中于如下領(lǐng)域：①豬的主要組織相容性復(fù)合體(SLA)；②NK細(xì)胞ADCC效應(yīng)對(duì)異種靶細(xì)胞的殺傷作用，以及人CD4~+和CD8~+T細(xì)胞介導(dǎo)異種細(xì)胞移植排斥反應(yīng)的機(jī)制。 本課題分析中國(guó)豬種SLA基因結(jié)構(gòu)特征，以及人NK細(xì)胞殺傷異種靶細(xì)胞過(guò)程中的胞吐作用及其機(jī)制，其立題依據(jù)是： 1．豬MHC(SLA)分子是引發(fā)急性和慢性異種移植排斥反應(yīng)的關(guān)鍵抗原，分析比較SLA與人HLA復(fù)合體遺傳結(jié)構(gòu)的異同，有助于探討異種移植排斥反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制，并為選擇豬種和制定臨床干預(yù)方案提供重要線索。 2．人NK細(xì)胞是參與異種移植排斥反應(yīng)的重要效應(yīng)細(xì)胞，其被靶細(xì)胞(即豬血管內(nèi)皮細(xì)胞)觸發(fā)，通過(guò)殺傷性胞吐(脫顆粒)過(guò)程而釋放顆粒酶、穿孔素等，可對(duì)豬血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮殺傷效應(yīng)，此乃豬→人異種器官移植急性排斥反應(yīng)中最早發(fā)生和最關(guān)鍵的病理過(guò)程。 一、異種移植備選中國(guó)豬種的經(jīng)典SLA基因序列分析 近二十余年，國(guó)外已分析了多個(gè)實(shí)驗(yàn)豬種的SLA復(fù)合體及其抗原系統(tǒng)，為探討人類免疫系統(tǒng)識(shí)別SLA抗原的機(jī)制奠定了理論基礎(chǔ)。 我國(guó)是豬種資源最為豐富的國(guó)家，豬種遺傳性狀穩(wěn)定，為篩選合適的供體豬種提供了有利條件。為探討我國(guó)豬種SLA基因結(jié)構(gòu)及其在豬→人異種器官移植中的作用，本 課題選擇中國(guó)不同地區(qū)3個(gè)常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)用豬種—湖北中華大白豬封閉群、海南五指山豬 近交系和云南版納小耳豬近交系為研究對(duì)象，根據(jù)Genbank中NIH小型豬SLAI類和 n類基因序列設(shè)計(jì)引物，采用RT一PCR方法獲得相應(yīng)基因的cDNA產(chǎn)物，電泳鑒定后純 化，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序或克隆入測(cè)序T載體后進(jìn)行雙向測(cè)序，獲得中國(guó)豬種SLA I類和n類基因cDNA序列，進(jìn)而借助DNA Tools 5.0軟件包和GCG Ver. 2.9軟件包進(jìn) 行相關(guān)比較和分析。本課題的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為: 1 .3個(gè)中國(guó)豬種SLA一DRA基因?yàn)楦叨缺Ｊ匦蛄校瑹o(wú)多態(tài)性，與NIH小型豬在核 昔酸和氨基酸水平的同源性均為100%;3個(gè)中國(guó)豬種其他的經(jīng)典SLAI類和n類基因 (PI、P14、DQA、DQB、D鄧)均具多態(tài)性，與NIH小型豬在核昔酸水平同源性高 于90%，在氨基酸水平同源性高于87%。結(jié)果提示:受試中國(guó)豬種Pl、P14、DQA、 DQB、DRB基因分別為相應(yīng)基因座位上的新等位基因。 2.中國(guó)人群中HLAI類高頻等位基因HLA一A*0 201與中國(guó)豬種P1和P14基因產(chǎn) 物的氨基酸序列同源性僅為63%，但在MHC分子多態(tài)樣al和a2功能區(qū)中與抗原膚錨 著位相對(duì)應(yīng)的位點(diǎn)，其氨基酸殘基基本相同。結(jié)果提示:不同種屬動(dòng)物MHC分子膚結(jié) 合區(qū)的差異較小，具有一定保守性。 3 .SLA一Pl、SLA一P14和HLA一A*0201產(chǎn)物中參與同人CDS結(jié)合所必需的關(guān)鍵氨 基酸殘基，僅有兩個(gè)存在差異，即:第223位丙氨酸(Ala)變?yōu)槔U氨酸(Val);第 235位丙氨酸(Ala)變?yōu)橘嚢彼?Lys)。SLA一Pl、SLA一P14和HLA一A*0201產(chǎn)物中參 與同人CDS結(jié)合所必需的關(guān)鍵氨基酸殘基的高度相似性，提示SLAI類分子可跨越種 屬界限而與人CDS分子結(jié)合，從而發(fā)揮相應(yīng)生物學(xué)作用。 4.兩個(gè)近交系豬種SLA一DRA和人HLA一DRA產(chǎn)物與CD4分子結(jié)合所必需的關(guān)鍵 氨基酸殘基基本相同，僅在兩個(gè)位點(diǎn)發(fā)生相同變異，即:第125位精氨酸(Arg)變?yōu)?甘氨酸(Gly);第129位擷氨酸(Val)變?yōu)楫惲涟彼?I le)。而SLA一DRB分子參與 結(jié)合CD4所必需的關(guān)鍵氨基酸殘基與人類完全相同，此現(xiàn)象在國(guó)內(nèi)外其他豬種SLA序 列研究中尚未見(jiàn)報(bào)道。上述結(jié)果，即SLAn類分子和人HLAn類分子結(jié)構(gòu)具有高度相 似性，進(jìn)一步提示:中國(guó)豬種SLAH類分子可跨越種屬界限而與人CD4分子結(jié)合，并 發(fā)揮相應(yīng)生物學(xué)作用。 5.中國(guó)豬種SLAI類分子(P1和P14)缺乏與NK細(xì)胞表面殺傷細(xì)胞抑制性受體 (KIR)結(jié)合的關(guān)鍵氨基酸殘基。提示:由于缺乏KIR的配基序列，中國(guó)豬種組織細(xì)胞 難以啟動(dòng)NK細(xì)胞的負(fù)調(diào)節(jié)信號(hào)，故豬源移植物易遭人(受者)NK細(xì)胞殺傷。由此， 本課題從新的角度闡明了豬~人異種移植中豬源組織細(xì)胞受損的可能機(jī)制。 綜上所述，通過(guò)在分子遺傳學(xué)水平分析、比較SLA和HLA基因結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)海南五 指山豬近交系和云南版納小耳豬近交系SLA與人HLA遺傳背景具有高度相似性，但兩 個(gè)中國(guó)豬種相關(guān)基因序列發(fā)生變異的氨基酸殘基與NIH小型豬有所不同。本課題獲得 了中國(guó)主要實(shí)驗(yàn)豬種SLA基因結(jié)構(gòu)的初步信息，通過(guò)進(jìn)一步闡明所發(fā)生變異的確切生 物學(xué)作用，可望為中國(guó)豬種用于人類
【圖文】：

圖1Figl湖北中華大白豬封閉群SLA經(jīng)典I類基因(Pl)RT一PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果AgarosegelelectroPhoresisanalysisofRT一PCRProduetsofelassiealSLA一PIgeneinHubeiWhitePigs泳道1:PCR產(chǎn)物分子量標(biāo)準(zhǔn)Lanel:PCRMarker泳道2一n:樣本LaneZ一11:thesamPles圖2顯示對(duì)P14基因RT一PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果:泳道1為PCR產(chǎn)物分子量標(biāo)準(zhǔn):泳道2至泳道11為10例不同個(gè)體樣本P14基因RT一PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，各泳道均可見(jiàn)一條清晰的特異性擴(kuò)增條帶，片段大小約為1.Ikb。圖2湖北中華大白豬封閉群SLA經(jīng)典I類基因(P14)RT一PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果Fig2AgarosegeleleetroPhoresisanalysisofRT一PCRProduetsofelassiealSLA一P14geneinHubeiWhitePigs泳道1:PCR產(chǎn)物分子量標(biāo)準(zhǔn)Lanel:PCRMarker泳道2一11:

泳道2一n:樣本LaneZ一11:thesamPles圖2顯示對(duì)P14基因RT一PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果:泳道1為PCR產(chǎn)物分子量標(biāo)準(zhǔn):泳道2至泳道11為10例不同個(gè)體樣本P14基因RT一PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，各泳道均可見(jiàn)一條清晰的特異性擴(kuò)增條帶，片段大小約為1.Ikb。圖2湖北中華大白豬封閉群SLA經(jīng)典I類基因(P14)RT一PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果Fig2AgarosegeleleetroPhoresisanalysisofRT一PCRProduetsofelassiealSLA一P14geneinHubeiWhitePigs泳道1:PCR產(chǎn)物分子量標(biāo)準(zhǔn)Lanel:PCRMarker泳道2一11:LaneZ一11:樣本thesamPles
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周洪偉,姚榛祥,杜成友;異種移植胎腸細(xì)胞介導(dǎo)排斥反應(yīng)的免疫學(xué)機(jī)制[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年02期

2 張曉剛,呂毅;細(xì)胞粘附分子與異種移植排斥反應(yīng)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).移植與血液凈化分冊(cè);2004年03期

3 邱仁宗;高新生命技術(shù)的倫理問(wèn)題[J];自然辯證法研究;2001年05期

4 鄧小康,姚榛祥;建立肝細(xì)胞皮下移植模型用以研究異種移植免疫反應(yīng)[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年04期

5 韓紅星;MHC在異種移植中作用的研究進(jìn)展[J];上海免疫學(xué)雜志;2002年01期

6 卞文;異種移植[J];國(guó)外科技動(dòng)態(tài);1998年08期

7 張偉;異種移植免疫排斥反應(yīng)中天然抗體的研究[J];解剖與臨床;2000年04期

8 楊勇賢;馬玉媛;章金剛;;小型豬在異種移植中的應(yīng)用前景[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2008年05期

9 劉全達(dá);異種胰島移植的免疫耐受誘導(dǎo)[J];免疫學(xué)雜志;2001年S1期

10 馬玉媛;楊勇賢;章金剛;;異種移植的病毒安全性研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2008年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 ;異種移植臨床試驗(yàn)管理要求[A];生命倫理學(xué)通訊（2009年第1期）[C];2009年

2 黃正根;吳軍;羅高興;賀偉峰;譚江琳;王曉娟;胡婕;楊世偉;彭旭;楊俊杰;彭彥孟;甘成軍;陳希煒;程文廣;袁順宗;張小容;葛良鵬;魏泓;;胎豬皮膚前體組織異種移植后的生長(zhǎng)發(fā)育鑒定[A];第八屆西南五省一市燒傷整形學(xué)術(shù)會(huì)議暨貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷整形分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

3 蔡玉芳;王燕蓉;沈新生;崔岫;;胎兒卵巢組織異種移植后的組織學(xué)研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

4 朱瑩;張春光;劉艷玲;王利君;吳健民;徐濤;;胞內(nèi)鈣水平對(duì)嗜中性粒細(xì)胞胞吐動(dòng)力學(xué)的影響[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

5 張治;沈振亞;;胸腺修飾和全身照射預(yù)處理受體在豬-猴異種移植模型中對(duì)獼猴抗豬抗體產(chǎn)生的影響[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

6 吳健敏;黃紅梅;章金剛;;豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒與異種移植安全性的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)成立大會(huì)暨第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

7 孔祥玉;敖桂霞;任麗杰;楊振江;楊占軍;;低濃度單寧酸對(duì)胞吐后膜再循環(huán)的作用[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

8 白麗;朱丹;周科明;周圍;李棟棟;王琰;張容穎;徐濤;;Ca~(2+)依賴和GTP依賴的大囊泡胞吐性質(zhì)的比較研究[A];第十次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2006年

9 邢曉為;易受南;董瓊;葉斌;童瓊娟;葉征;王維;;異種移植候選供體寧鄉(xiāng)豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒調(diào)查[A];第八次全國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議(中華醫(yī)學(xué)會(huì)2009年醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)年會(huì))論文摘要匯編[C];2009年

10 宋繼昌;李濤;舒桂明;杜智;孫綿方;;APA微囊豬肝細(xì)胞異種移植研究[A];21世紀(jì)醫(yī)學(xué)工程學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2001年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 龍軍　特約記者 禹愛(ài)華;《長(zhǎng)沙宣言》將推動(dòng)國(guó)際異種移植發(fā)展[N];光明日?qǐng)?bào);2008年

2 記者 段涵敏;首個(gè)異種移植國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)將在長(zhǎng)產(chǎn)生[N];湖南日?qǐng)?bào);2008年

3 暨南大學(xué)醫(yī)藥生物技術(shù)研究開發(fā)中心 王通博士;異種移植 曲徑通幽[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

4 記者 王君平;全球異種移植臨床研究者共商“規(guī)范”[N];人民日?qǐng)?bào);2008年

5 徐蘭山　徐石平;猛士高歌借大風(fēng)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

6 本報(bào)記者　 楊熙明 譚克揚(yáng);異種胰島細(xì)胞移植[N];湖南日?qǐng)?bào);2006年

7 金晶;動(dòng)物器官移植給人,德研究有新進(jìn)展[N];新華每日電訊;2006年

8 董家鴻;免疫耐受:夢(mèng)寐以求“上上之策”[N];健康報(bào);2003年

9 本報(bào)記者 顏秋雨　康平 通訊員 李虹輝;王維 心中有夢(mèng)就能飛[N];健康報(bào);2009年

10 項(xiàng)錚;器官移植：實(shí)現(xiàn)人類久遠(yuǎn)的夢(mèng)想[N];科技日?qǐng)?bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 吳群;豬—人異種移植相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究——中國(guó)豬種SLA基因序列分析及人NK細(xì)胞通過(guò)胞吐途徑殺傷豬內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)制探討[D];武漢大學(xué);2004年

2 王健;整合素ανβ6內(nèi)吞胞吐循環(huán)在調(diào)控結(jié)腸癌細(xì)胞遷移中的作用及分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2012年

3 楊光倫;NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)途徑在延遲性異種移植排斥反應(yīng)中的作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

4 張明軍;小鼠STO細(xì)胞植入無(wú)免疫抑制成年大鼠肝臟的異種移植研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

5 劉浩;類纖維蛋白原蛋白在異種移植中的作用[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2002年

6 關(guān)兆杰;抗凝治療對(duì)延遲性異種移植排斥反應(yīng)的作用[D];汕頭大學(xué);2003年

7 李志偉;人肝門部膽管癌裸鼠肝門移植模型的建立及CD、HSV-tk雙自殺基因治療實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2004年

8 孟強(qiáng);天然抗體、補(bǔ)體及c-myc基因在異種移植超急性排斥反應(yīng)中的作用[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1999年

9 宋寧;在異種移植中血紅素氧化酶-1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

10 雷瑞鵬;異種移植：哲學(xué)反思與倫理問(wèn)題[D];華中科技大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 周格知;裸小鼠異種移植人腦膠質(zhì)瘤中血管形成相關(guān)因子的初步研究[D];蘇州大學(xué);2003年

2 晏青燕;與異種器官移植相關(guān)的寡糖抗原及其類似物的一釜合成研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

3 張友來(lái);凍干輻照豬硬腦膜異種移植的實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué);2009年

4 萬(wàn)斌;NO對(duì)微囊化兔神經(jīng)組織移植后大鼠脊髓損傷的作用[D];江西醫(yī)學(xué)院;2005年

5 韓愛(ài)卿;人胎兒卵巢異種移植的組織學(xué)研究[D];山東大學(xué);2005年

6 葛良鵬;大鼠糖尿病潰瘍模型的制備及其生物學(xué)特性的初步研究[D];西南師范大學(xué);2005年

7 朱耀生;臨床醫(yī)學(xué)研究中帶有缺失數(shù)據(jù)和截?cái)鄶?shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)推斷方法[D];東北師范大學(xué);2006年

8 戴江華;微囊化異種神經(jīng)組織細(xì)胞移植對(duì)脊髓損傷后細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];江西醫(yī)學(xué)院;2004年

9 鄒春芳;人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及～（131）I標(biāo)記單抗OC125的實(shí)驗(yàn)研究[D];江西醫(yī)學(xué)院;2004年

10 郝念;角膜體外重建異種生物載體材料生物相容性研究[D];暨南大學(xué);2004年

本文編號(hào)：2608463