【摘要】： 目的: 白細(xì)胞介素-13(Interleukine-13,IL-13)是一個(gè)主要由Th2細(xì)胞分泌的多效能細(xì)胞因子。已證實(shí)IL-13是調(diào)控肺纖維化的主要Th2細(xì)胞因子,IL-13通過(guò)與IL-13受體α1(IL-13Rα1)相結(jié)合可以產(chǎn)生促纖維化作用。而最近研究發(fā)現(xiàn)IL-13受體α2(IL-13Rα2),可以抑制IL-13信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的功能,上調(diào)IL-13Rα2的表達(dá),可以抑制膠原的產(chǎn)生。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肺成纖維細(xì)胞(HFL-1)是否表達(dá)IL-13Rα2,研究溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)是否能上調(diào)IL-13Rα2的表達(dá),進(jìn)而是否能抑制肺成纖維細(xì)胞膠原的合成。 方法: 1.臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)HFL-1細(xì)胞的活性。2.HE染色觀(guān)察HFL-1細(xì)胞形態(tài)。3.檢測(cè)LPA刺激HFL-1細(xì)胞對(duì)IL-13Rα1、IL-13Rα2mRNA表達(dá)的影響:分別以L(fǎng)PA不同濃度、不同時(shí)間刺激HFL-1,RT-PCR檢測(cè)IL-13Rα1、IL-13Rα2mRNA的表達(dá)。4.檢測(cè)LPA刺激HFL-1細(xì)胞對(duì)Ⅰ型膠原(procollagen typeⅠ,PCOLⅠ)mRNA表達(dá)的影響:首先LPA以不同時(shí)間刺激HFL-1細(xì)胞,用RT-PCR檢測(cè)PCOLⅠmRNA的表達(dá),再分四組:空白組、LPA組、IL-13組及LPA和IL-13混合組,RT-PCR檢測(cè)PCOLImRNA的表達(dá)。5.免疫組化檢測(cè)Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)。 結(jié)果: 1. HFL-1細(xì)胞活性良好,且LPA對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用。2. HE染色觀(guān)察細(xì)胞為長(zhǎng)梭形,核為橢圓形。3.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,LPA刺激HFL-1細(xì)胞對(duì)IL-13Rα1mRNA的表達(dá)沒(méi)有影響,但對(duì)IL-13Rα2mRNA有影響,隨著LPA刺激時(shí)間的延長(zhǎng),IL-13Rα2mRNA的表達(dá)逐漸增高,隨著LPA刺激濃度的增高,IL-13Rα2mRNA的表達(dá)也逐漸增高,但10μM組與1μM組比較有所降低,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4. RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,LPA刺激HFL-1細(xì)胞可以降低PCOLImRNA的表達(dá),并且隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng),PCOLImRNA的表達(dá)逐漸減低。另外,結(jié)果顯示IL-13組與對(duì)照組相比,IL-13組PCOLImRNA的表達(dá)增高,而LPA和IL-13混合組,PCOLImRNA的表達(dá)比LPA組較高,但比IL-13組較低。5.免疫組化結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,IL-13組Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)較高,LPA組Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)較底,而LPA和IL-13混合組,PCOLI蛋白的表達(dá)比LPA組較高,但比IL-13組較低。 結(jié)論: 1. LPA刺激HFL-1對(duì)IL-13Rα1的表達(dá)沒(méi)有影響,但可以上調(diào)IL-13Rα2的表達(dá),并且成時(shí)間濃度依賴(lài)性。2. LPA刺激HFL-1可以降低PCOLI的表達(dá),并且呈時(shí)間依賴(lài)性。3. IL-13刺激HFL-1可以上調(diào)PCOLI的表達(dá)。
【圖文】：

圖 2.HFL-1 細(xì)胞 HE 染色圖片(×400)Figure2. Diagram of HFL-1s by HE staining樣品的純度與質(zhì)量D260nm/OD280nm 值均在 1.8～2.0 之間，表明總 R瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果：顯示 18S（相當(dāng)于 1.9kb（mRNA）清晰，且 28：18 為 2：1，，提示 RN28S18S

圖 2.HFL-1 細(xì)胞 HE 染色igure2. Diagram of HFL-1s純度與質(zhì)量/OD280nm 值均在 1.8～2凝膠電泳結(jié)果：顯示 18A）清晰，且 28：18 為
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 趙洪文;肺成纖維細(xì)胞在肺纖維化中的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊(cè);1996年03期

本文編號(hào)：2568986