【摘要】：目的：檢測弓形蟲感染誘導宿主細胞自噬的程度，研究細胞自噬在弓形蟲增殖復制中的作用。 方法：對使用自噬抑制劑、誘導劑作用后不同時間點的弓形蟲感染復制動力學檢測以及形態(tài)檢測，判斷自噬在弓形蟲增殖復制過程中的作用。昆明小鼠（雌鼠，5-7周齡，體重16-20g）用于RH株（弓形蟲強毒株）的保種和實驗。將RH株腹腔注射感染小鼠平均4-5天發(fā)病無菌抽取腹水純化弓形蟲計數(shù)后感染HEF細胞用于實驗。實驗分組如下：①正常對照組（HEF細胞）②RH株+HEF細胞③自噬抑制劑+RH株+HEF細胞④自噬誘導劑+RH株+HEF細胞。分別用自噬抑制劑Bafilomycin A1及自噬誘導劑氯化鋰作用于HEF細胞，，然后將弓形蟲（RH株）速殖子懸液分別以蟲/細胞2:1、4:1、8:1、16:1感染HEF細胞,作用1h、2h、4h、8h、24h、48h、96h。將計數(shù)后的HEF細胞于六孔板中培養(yǎng)待細胞爬片貼壁后分別進行Giemsa染色和吖啶橙熒光染色，于24孔板中進行MDC（Monodansylcadaverin）熒光染色。采用吖啶橙熒光染色和MDC熒光染色檢測HEF細胞自噬情況，采用Giemsa染色檢測不同時間點的弓形蟲感染復制動力學。通過建立弓形蟲感染的小鼠模型，分別使用自噬抑制劑巴弗洛霉A1（bafilomycinA1）和自噬誘導劑氯化鋰對弓形蟲感染小鼠模型進行了干預，應用熒光定量PCR檢測不同實驗條件下弓形蟲的增殖情況。 結(jié)果：弓形蟲增殖觀察：Giemsa染色觀察弓形蟲速殖子在細胞內(nèi)的寄生：隨機鏡檢100個細胞，檢測不同時間蟲體的侵襲率和胞內(nèi)平均增殖數(shù)，侵襲率=侵襲的細胞數(shù)/100×100%、胞內(nèi)平均增殖數(shù)=各細胞內(nèi)蟲體數(shù)量總和/被侵襲的細胞數(shù)×100%。吖啶橙和MDC熒光染色用以觀察判斷細胞自噬過程的發(fā)生情況。吖啶橙和MDC熒光染色結(jié)果表明自噬抑制劑BafilomycinA1及自噬誘導劑氯化鋰可分別抑制和促進HEF細胞自噬，Giemsa染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用自噬誘導劑氯化鋰可以促進弓形蟲在HEF細胞內(nèi)的增殖，使用自噬抑制劑Bafilomycin A1可以抑制弓形蟲在HEF細胞內(nèi)的增殖。熒光定量PCR檢測實驗結(jié)果表明，巴弗洛霉素A1劑量與小鼠體內(nèi)弓形蟲數(shù)量呈負相關，而誘導劑氯化鋰與小鼠體內(nèi)弓形蟲數(shù)量呈正相關。 結(jié)論：弓形蟲感染后可促進HEF細胞自噬，促進HEF細胞自噬可以促進弓形蟲在宿主細胞內(nèi)的增殖，調(diào)控宿主細胞自噬可調(diào)控弓形蟲增殖復制。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R382.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李祥瑞;;弓形蟲病的流行的新趨勢[J];動物醫(yī)學進展;2010年S1期

2 段振玲;王贊宏;彭芝蘭;;自噬基因Beclin 1在SKOV3細胞中的表達及其調(diào)控相關信號傳導途徑的研究[J];昆明醫(yī)學院學報;2010年09期

3 王琦;蘇舒;王立新;;胞內(nèi)感染病原體與細胞自噬相互作用的研究進展[J];東南大學學報(醫(yī)學版);2010年03期

4 向琳;楊愛軍;劉偉;王晨昱;張春雨;田莉;李敏;;雷帕霉素誘導自噬對結(jié)腸癌細胞侵襲、遷移的影響及其可能機制[J];臨床與實驗病理學雜志;2013年10期

5 郭傳tx;金黃色葡萄球菌侵入成骨細胞機制初探[J];實用口腔醫(yī)學雜志;2002年04期

6 石亮;李一榮;胡麗華;;自身免疫調(diào)節(jié)因子促進THP-1細胞的自噬性凋亡[J];華中科技大學學報(醫(yī)學版);2010年04期

7 徐冉;魏瓏瓏;李志強;李曉鋒;韓麗輝;;BNIP3在細胞凋亡與自噬中的作用[J];山東醫(yī)藥;2013年28期

8 李瓊;吳淑燕;黃瑞;;自噬在細菌感染與免疫應答中的作用[J];微生物與感染;2009年02期

9 丁關娥;徐明寶;周永華;范峰;崔紅平;;無錫地區(qū)雞弓形蟲感染的血清流行病學調(diào)查[J];中國血吸蟲病防治雜志;2012年02期

10 王艷 ,徐小元 ,公維波 ,王勤環(huán) ,何為 ,劉志紅;Sybr green1實時定量PCR檢測乙型肝炎病毒DNA的探索[J];中華實驗和臨床病毒學雜志;2002年02期

本文編號：2566461