【摘要】： 目的：建立小鼠肝竇狀內(nèi)皮細(xì)胞(sinusoidal endothelial cells, SEC)的分離培養(yǎng)方法,研究其生物學(xué)特性。 方法：中性蛋白酶(dispase)消化小鼠肝組織,Percoll密度梯度離心分離消化后的細(xì)胞懸液,用內(nèi)皮細(xì)胞選擇培養(yǎng)基及酶差異消化法純化SEC；免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)SEC的表面標(biāo)志,電鏡分析SEC的超微結(jié)構(gòu),觀察DiI熒光標(biāo)記的乙酰低密度脂蛋白(Acetylated-Low Density Lipoprotein, DiI-Ac-LDL)攝取能力以及體外成血管能力分析SEC的功能。 結(jié)果：分離純化后的細(xì)胞呈典型鵝卵石樣內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài),這些細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特征性標(biāo)志vWF,但不表達(dá)CD31以及間質(zhì)細(xì)胞和上皮細(xì)胞的表面標(biāo)志,具有竇狀內(nèi)皮細(xì)胞特征性的窗孔結(jié)構(gòu),Weibel-Palade小體；能攝取DiI-Ac-LDL,并有一定的成血管能力。 結(jié)論：建立了一種分離、培養(yǎng)SEC的方法,為研究SEC的功能奠定了基礎(chǔ)。 目的：研究自發(fā)永生化肝竇狀內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)特性 方法：5-溴-4氯-3-吲哚基-β-d-半乳糖苷(X-gal)染色檢測(cè)衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶(senescence-associated (3-galactosidase SA-(3-Gal)活性。免疫細(xì)胞化學(xué)染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)永生化SEC的表面標(biāo)志,細(xì)胞生長(zhǎng)曲線分析永生化SEC的增殖能力。DiI標(biāo)記的乙�；兔芏戎鞍�(Acetylated-Low Density Lipoprotein, DiI-Ac-LDL)攝取能力、體外成血管能力分析永生化SEC的功能。染色體核型分析永生化SEC遺傳穩(wěn)定性；軟瓊脂體外培養(yǎng)、SCID小鼠體內(nèi)接種觀察永生化SEC體內(nèi)外成瘤性,Western blot分析永生化SEC P53蛋白表達(dá)水平的改變。 結(jié)果：在體外培養(yǎng)8代后,SEC發(fā)生衰老。衰老細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)約40天左右,衰老細(xì)胞層上出現(xiàn)新的圓形、折光性強(qiáng)的新生細(xì)胞,這些細(xì)胞呈克隆性、多層生長(zhǎng),且隨傳代次數(shù)的增加,增殖能力增強(qiáng),與永生化細(xì)胞特性一致。表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特征性標(biāo)志物vWF和CD31,也表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志CD90、CD105和desmin;能攝取DiI-Ac-LDL,但失去成血管能力；體內(nèi)外均無成瘤性,P53蛋白表達(dá)明顯增加。 結(jié)論：肝竇狀內(nèi)皮細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下自發(fā)永生化。
【圖文】：

爆口杏·_、圖1一 1SEC的形態(tài)特征注:圖1一 1sEc的形態(tài)(x100)。A:原代sEc的細(xì)胞形態(tài);B:純化sEc細(xì)胞形態(tài)。圖1一 2sEC免疫表型分析注:A:vwF免疫細(xì)胞化學(xué)染色 (x400);B:CD31免疫熒光染色(cD31，綠色;I)Apl，藍(lán)色)(X20o);C:CK19免疫熒光染色(CK19，，綠色;DApl，藍(lán)色)(xZoo);x):eD90免疫熒光染色(CD90，綠色;DApl，藍(lán)色 )(X200);E:CDIOS免疫熒光染色‘CD105，綠色;DAPI

碩l一‘學(xué)位論文附l冬]圖1一 3SEC吞噬Ac一LDL熒光結(jié)果份i:SEC攝取DII一Ae一 IJDL(X100)。A:f)API(、流色):B:細(xì)胞攝取DII一Ae一LDL(爹，色);C:A干 1IB合j戊。碑豁蓋一歲熟‘產(chǎn)聲節(jié)一叮一釁;/:一認(rèn)_…健口心亙庵翻.吞‘也圖1一 4SEC體外成血管實(shí)驗(yàn)結(jié)果八:S盯體外形成而一竹的能力(X40)。A:4h細(xì)胞形成山L管結(jié)構(gòu);11:(ih細(xì)胞形成血管結(jié)構(gòu);〔’:I()h紅f}胞形成If!!_乍育·結(jié)構(gòu):f〕:12h紅{{j泡形j戊If{}牛竅二爹，，，構(gòu):E:14h細(xì)胞形j戊血管結(jié)構(gòu):F:陽性對(duì)照內(nèi)皮fll_細(xì)胞4h!}寸形成而管結(jié)構(gòu)。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 羅成基;造血微環(huán)境基質(zhì)細(xì)胞的研究概況及前景[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;1999年01期

2 汪保和,黃煒琦,王綺如;骨髓內(nèi)皮細(xì)胞分泌的抑制CFU-F生長(zhǎng)的因子(英文)[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2000年01期

3 黃暢;朱文彪;朱海林;汪保和;王綺如;;小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞系的長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)和生物學(xué)特性鑒定[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2007年06期

4 段華新;盧光t;程臘梅;;臍血來源的兩種內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2008年02期

本文編號(hào)：2560524