【摘要】： 目的:通過腹主動脈插管灌注膠原酶消化分離胰腺星狀細胞(pancreatic stellate cell,PSC),建立簡單易行的PSC分離方法,并對PSC進行培養(yǎng)和鑒定;初步探討PSC早期活化的機制。 方法:大鼠腹主動脈插管灌注后,經膠原酶消化、Nycodenz密度梯度離心,分離得到PSC;通過觀察細胞形態(tài)、胞質內脂滴和免疫細胞化學方法檢測結蛋白(desmin)、神經膠質酸纖維蛋白(glial fibrillaryacidic protein,GFAP)、α平滑肌肌動素(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表達來鑒定PSC;RT-PCR方法及WestBlot方法測定PSC中Smad2/3表達。 結果:腹主動脈灌注法分離得到PSC,產率、活力和純度分別為:15.3±4.6×10~3/g體重、95.0±3.5%、＞80%;培養(yǎng)24h后大多數(shù)細胞已貼壁,呈星狀或多角形,48h后表達desmin、GFAP,并在96h后表達α-SMA;Smad2/3在PSC早期活化中顯著高表達,48H后達其高峰。 結論:通過腹主動脈灌注法較容易分離得到PSC,其產率、活力和純度較高,經鑒定后能夠滿足體外實驗要求;Smad2/3的高表達是PSC早期活化過程中的中心環(huán)節(jié)。Smad2/3的高表達與Smad7無法抑制其活化從而造成兩者失去平衡是引起PSC活化的主要原因。
【圖文】：

后將I型受體磷酸化，磷酸化的I型受體誘導TGF一p傳導通路上的SmadZ、Smad3磷酸化，Smad4與磷酸化的SmadZ或Smad3形成復合物，，該復合物將信號轉導進細胞核內并發(fā)揮相應的功能(如圖2)。Smad7由于缺乏C末段磷酸化位點不能被I型受體磷酸化，卻通過干擾工型受體阻礙SmadZ和Smad3磷酸化來減弱TGF一p的生物學作用[‘3一”]。衛(wèi)王~pandsxl份ds圖2:TGF一p作用下，SmadZ的活化過程 Hirohideohnishi[‘6]研究了smadZ的的作用(smasZ介導了TGF一pl的信號通路，與PSCS活化呈正相關，促進PSCS產生EeM)，該研究與smadZ在即es中的相關研究[，7]有差異。smad7在PseS活化中的作的相關研究未見報道。2003年，Dooley等[’‘嘀腺病毒載體將Smad7一cDNA導入大鼠肝纖維化模型中

培養(yǎng)48h后PSC表達GEAP(x100)
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R657.5;R329

【參考文獻】

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1 范萍,武正炎,王水,查小明,甄林林;人外周血中樹突狀細胞的誘導、培養(yǎng)及其表面標記的初步研究[J];南京醫(yī)科大學學報;2002年01期

2 陳啟龍,李國威,陳曉,林仁勇,徐新建,溫浩;轉化生長因子β_1在胰腺組織中的表達:慢性胰腺炎發(fā)病機制探討[J];中國普通外科雜志;2002年10期

本文編號：2558940