【摘要】： 腦卒中是一類具有高發(fā)病率、高致殘率及高死亡率特點的疾病,迄今為止,尚缺乏有效的防治措施。內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是存在于胎肝、臍帶血和成人外周循環(huán)血中的、能夠分化為內(nèi)皮細(xì)胞的多潛能細(xì)胞。研究表明內(nèi)皮祖細(xì)胞參與缺血性腦卒中后新生血管的形成、修復(fù)損傷的內(nèi)皮、促進(jìn)神經(jīng)再生,在防治支架術(shù)后血栓形成及官腔再狹窄,以及構(gòu)建組織工程微血管網(wǎng)絡(luò)方面具有廣泛的應(yīng)用前景。 我們實驗立足于臨床,研究人臍帶血(umbilical cord blood,CB)、外周血(peripheral blood,PB)EPCs的分離、培養(yǎng)和鑒定,為EPCs在缺血性腦卒中的臨床應(yīng)用提供技術(shù)支持。實驗選取人臍帶血外周血各15ml,采用1.077 Ficoll-Paque密度梯度離心法獲得單個核細(xì)胞(monocytes,MNCs),聯(lián)合貼壁篩選法進(jìn)行純化,用含VEGF的M199培養(yǎng)基對MNCs進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。觀察細(xì)胞的生長特性,從形態(tài)學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、流式細(xì)胞學(xué)及吞噬攝取實驗五方面對細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 體外培養(yǎng)的EPCs先后出現(xiàn)“血島”樣細(xì)胞集落、首尾相連條索樣、網(wǎng)狀及鵝卵石樣形態(tài),流式細(xì)胞學(xué)檢測細(xì)胞表達(dá)祖細(xì)胞表面標(biāo)志CD34、CD133、CD105,培養(yǎng)第7d的細(xì)胞高度表達(dá)內(nèi)皮系細(xì)胞特異性標(biāo)志KDR及CD31,加之細(xì)胞吞噬乙�；兔芏戎鞍�(ac-LDL),胞膜結(jié)合荊豆凝集素-1(UEA-1),進(jìn)一步證明我們獲得了EPCs。 隨著自體細(xì)胞治療和基因修飾的進(jìn)展,EPCs成為血管相關(guān)性疾病的種子細(xì)胞,我們從臍帶血和外周血中成功分離出了EPCs,以期為缺血性腦卒中患者自體內(nèi)皮祖細(xì)胞回輸及臨床干細(xì)胞庫的建立提供理論及技術(shù)支持。
【圖文】：

圖2.1 MMP-9促進(jìn)mKitL向sKitL 轉(zhuǎn)化，，cKit陽性祖細(xì)胞從骨髓微環(huán)境血管區(qū)遷移，這種易位激活EPCs由休眠進(jìn)入增殖狀態(tài)。圖片摘自ov M, Erl W, Weber PC. Endothelial Progenitor Cells Mobilization, DifferentiaArterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2003,23:1185-1189.acental growth factor，PlGF）和激素類[21-22]如雌激素、促紅細(xì)胞生員具有相同的調(diào)節(jié)作用。此外，他汀類藥物通過活化Akt信號通路Cs參與新生血管生成[23-26]。EPCs一旦受到動員，就會從骨髓的血中。EPCs 參與新生血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞更新的機制傳統(tǒng)觀念認(rèn)為成人體內(nèi)新生血管的形成只有血管新生（angiogen已有血管處芽生出新的毛細(xì)血管，EPCs的成功鑒定改變了我們對識，EPCs可以選擇性募集到受損或缺血組織區(qū)，在以前未存在血

植入體內(nèi)的EPCs可能通過釋放細(xì)胞因子促進(jìn)成熟內(nèi)皮細(xì)胞的增殖遷移，進(jìn)而增強其血管生成能力。圖2.2 血管新生（左）與 血管發(fā)生（右）血管新生由已存在的原位血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖遷移形成血管結(jié)構(gòu)；血管發(fā)生是在一系列細(xì)胞因子作用下由骨髓EPCs動員到循環(huán)血中并募集到缺血損傷部位，增殖分化遷移參與形成血管結(jié)構(gòu)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 朱軍慧;馬彩艷;陳君柱;王興祥;張芙榮;孫堅;;高同型半胱氨酸血癥患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞的變化[J];臨床心血管病雜志;2008年04期

2 黃偉劍;肖方毅;張懷勤;林以諾;蔡雪黎;周浩;林杰;楊德業(yè);;兩種內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)兔頸動脈內(nèi)膜損傷血管的對比研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年44期

本文編號：2558806