【摘要】： 目的：建立一種簡潔、有效的大鼠異位心臟移植模型,作為器官移植的實(shí)驗研究方案。采用大鼠心臟移植急性排斥反應(yīng)模型研究帶蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的人NFAT最小DNA結(jié)合域(protein transduction domain conjugated human NFAT mini DNA binding domain, PTD-△hNFATminiDBD)體內(nèi)抗移植排斥反應(yīng)的功能。 方法：以O(shè)no法為基礎(chǔ)并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)。受體手術(shù)先進(jìn)行至準(zhǔn)備縫合。供體生理鹽水冰塊腹部降溫至雙腋部低溫后,胸腔打開以冰生理鹽水快速致心跳停止。供心采用直視下縫合。建立Wistar-SD大鼠腹部心臟移植急性排斥模型。增殖含△hNFATminiDBD. PTD-△hNFATminiDBD質(zhì)粒載體的E·Coli M15菌株,誘導(dǎo)△hNFATminiDBD.PTD-△hNFATminiDBD融合蛋白表達(dá)并提取、純化。Wistar和SD大鼠隨機(jī)配對進(jìn)行手術(shù),將手術(shù)成功的36只大鼠隨機(jī)分成四組：生理鹽水對照組、△hNFATminiDBD蛋白組、PTD-△hNFATminiDBD蛋白組、環(huán)孢素組。各組術(shù)后第一天分別予以不同劑量的相應(yīng)藥物腹腔注射,每天一次,共一周。觀察移植心臟存活時間并進(jìn)行統(tǒng)計分析,術(shù)后第七天各組中隨機(jī)取1例供心切片HE染色。 結(jié)果：成功建立了大鼠心臟移植模型,本項研究采用改良Ono于術(shù)方法,共制作大鼠心臟異位移植模型41例,成功37例,成功率為90.2%。建立的Wistar-SD大鼠腹部心臟異位移植模型隨機(jī)分成四組,各組經(jīng)藥物處理后,其供心存活時間分別為：空白對照組：8.63±0.95d、△hNFATminiDBD蛋白組：9.06±1.32d、PTD-△hNFATminiDBD蛋白組：15.06±0.94d、環(huán)孢素組：22.94±1.15d。PTD-△hNFATminiDBD蛋白組大鼠移植心臟的存活時間較空白對照組顯著延長(P0.05),但較環(huán)孢素組短(P0.05)。各組動物心臟組織經(jīng)病理切片后觀察結(jié)果支持統(tǒng)計分析結(jié)果。 結(jié)論：本實(shí)驗室采用的改良Ono手術(shù)方法,能簡化手術(shù)步驟、提高手術(shù)成功率,特別有利于無心臟移植手術(shù)或血管手術(shù)經(jīng)驗者進(jìn)行相關(guān)研究。PTD-△hNFATminiDBD融合蛋白能顯著延長大鼠異位移植心臟的存活時間。
【圖文】：

受體腹部準(zhǔn)備PreParationofree甲ient

20ml注射器抽取冰生理鹽水分別從右肺動脈遠(yuǎn)端口、下腔靜脈切口、主動脈近端口沖洗心腔和冠脈中的積血，至流出液清。然后用4一絲線整體結(jié)扎。顯微手術(shù)剪剪斷肺靜脈、上下腔靜脈，取出心臟(見圖2.2)，置入冰生理鹽水中，并用冰生理鹽水小片紗布包裹。(3)異位心臟移植:lml注射器抽取0.2ml(SOU)肝素生理鹽水后再抽取生理鹽水至0.5ml，于受體下腔靜脈預(yù)切開點(diǎn)穿入下腔靜脈，緩慢注入以抗凝和補(bǔ)充血容量。干棉球壓迫后即于腹主動脈和下腔靜脈遠(yuǎn)近端分別上血管夾，于腹主動脈與供心主動脈端側(cè)吻合點(diǎn)前外側(cè)用lml注射器針頭穿孔后，顯微手術(shù)剪開Zmm左右(稍小于供心主動脈口)，，將供心用冰生理鹽水紗布包裹后置于切口左側(cè)，上置生理鹽水冰塊。用8一0顯微無損傷縫合線從腹主動脈切開頂點(diǎn)右側(cè)進(jìn)針，按順時針方向?qū)⒐┬闹鲃用}和腹主動脈連續(xù)縫合。針距和邊距各為o.smm左右。打結(jié)前腹腔注入少量生理鹽水浸泡吻合口驅(qū)除血管內(nèi)空氣�？p合完成后將近端血管夾稍試開放即再夾閉
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R-332;R654.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2547255