發(fā)布時(shí)間：2019-08-26 20:25

【摘要】：目的:研究高糖對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。方法:分離培養(yǎng)SD乳鼠心肌細(xì)胞,分別用10-50 mmol/L終濃度的葡萄糖進(jìn)行干預(yù),MTT測定各組心肌細(xì)胞的生長活力;激光共聚焦顯微鏡、脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)和流式細(xì)胞術(shù)用于觀察和檢測心肌細(xì)胞凋亡;將心肌細(xì)胞分為3組:對(duì)照組、高糖組和抗氧化劑組,分別檢測各組上清液中乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平;熒光定量PCR檢測高糖對(duì)凋亡相關(guān)基因P53、Pax3、Bmp4、Slug和Msx1表達(dá)的影響。結(jié)果:MTT結(jié)果顯示高糖能濃度依賴性地抑制心肌細(xì)胞的生長活力;激光共聚焦顯微術(shù)、TUNEL染色和流式細(xì)胞術(shù)均表明高糖能誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡;與對(duì)照組相比,高糖組LDH、MDA含量明顯增高,SOD含量顯著下降;與高糖組相比,抗氧化劑組LDH、MDA含量明顯下降,SOD含量顯著上升;抗氧化劑組LDH、MDA、SOD的含量較對(duì)照組無明顯變化;流式細(xì)胞檢測顯示高糖組細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組明顯增加,而抗氧化劑組細(xì)胞凋亡率較高糖組則顯著下降;熒光定量PCR結(jié)果表明高糖能上調(diào)P53、Msx1基因的表達(dá),下調(diào)Pax3、Bmp4、Slug基因的表達(dá)。結(jié)論:高糖可能通過氧化應(yīng)激和改變凋亡相關(guān)基因的表達(dá)從而誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。 目的:研究尼古丁對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。方法:分離培養(yǎng)SD乳鼠心肌細(xì)胞,分別用0.1-100μM終濃度的尼古丁進(jìn)行干預(yù),MTT測定各組心肌細(xì)胞的生長活力;激光共聚焦顯微鏡、脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)和流式細(xì)胞術(shù)用于觀察和檢測心肌細(xì)胞凋亡;將心肌細(xì)胞分為3組:對(duì)照組、尼古丁組和抗氧化劑組,分別檢測各組上清液中乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平;熒光定量PCR檢測尼古丁對(duì)凋亡相關(guān)基因P53、Bax、Bcl-2、Pax3、Bmp4、Slug和Msx1表達(dá)的影響。結(jié)果:MTT結(jié)果顯示尼古丁能濃度依賴性地抑制心肌細(xì)胞的生長活力;激光共聚焦顯微術(shù)、TUNEL染色和流式細(xì)胞術(shù)均表明尼古丁能誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡;與對(duì)照組相比,尼古丁組LDH、MDA含量明顯增高,SOD含量顯著下降;與尼古丁組相比,抗氧化劑組LDH、MDA含量明顯下降,SOD含量顯著上升;抗氧化劑組LDH、MDA、SOD的含量較對(duì)照組無明顯變化;流式細(xì)胞檢測顯示尼古丁組細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組明顯增加,而抗氧化劑組細(xì)胞凋亡率較尼古丁組則顯著下降;熒光定量PCR結(jié)果表明尼古丁能上調(diào)P53、Bax和Msx1基因的表達(dá),下調(diào)Bcl-2、Pax3、Bmp4和Slug基因的表達(dá)。結(jié)論:尼古丁可能通過氧化應(yīng)激和改變凋亡相關(guān)基因的表達(dá)誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

圖 1 培養(yǎng) 72h 后的心肌細(xì)胞形態(tài)（×400）度葡萄糖對(duì)心肌細(xì)胞生長活力的影響顯示，10 mmol/ L濃度組與對(duì)照組間的細(xì)胞活力無統(tǒng)L濃度組的細(xì)胞活力較對(duì)照組明顯下降(P < 0.01)，且選取最低有效濃度 20 mmol/L作為葡萄糖實(shí)驗(yàn)濃度。不同濃度葡萄糖對(duì)心肌細(xì)胞生長活力的影響 (x ±s, 葡萄糖濃度(mmol/L) A 值 P 值0.506±0.01610 0.502±0.015 0.23620 0.461±0.011* 0.000

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文三、激光共聚焦顯微鏡觀察心肌細(xì)胞凋亡細(xì)胞爬片經(jīng) Annexin V/PI 雙染后置于激光共聚焦顯微鏡下觀察。高糖組可見明顯的細(xì)胞凋亡，早期凋亡細(xì)胞膜呈綠色熒光,細(xì)胞核不著色；中晚期凋亡細(xì)胞膜呈綠色熒光,細(xì)胞核呈紅色熒光。對(duì)照組為正常細(xì)胞，，僅發(fā)出微弱的綠色熒光（圖 2）。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2529531