【摘要】： 目的： 針對(duì)IL-17對(duì)某些細(xì)胞因子/趨化性細(xì)胞因子及一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表達(dá)的調(diào)節(jié),探討IL-17在小鼠沙眼衣原體肺炎菌株(Chlamydia muridarum, Cm)呼吸道感染中的作用及機(jī)制。 方法： BALB/c小鼠鼻腔吸入1×103 IFU Cm,建立小鼠Cm呼吸道感染模型。于感染后不同天數(shù)處死小鼠。利用RT-PCR及EL ISA技術(shù)檢測(cè)小鼠肺組織IL-17mRNA及蛋白的表達(dá),并利用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色技術(shù)檢測(cè)小鼠脾臟IL-17+ CD4+T細(xì)胞即Th17細(xì)胞百分率,確定IL-17及Th17在小鼠衣原體肺感染中的產(chǎn)生及誘導(dǎo)。利用抗鼠IL-17單克隆抗體鼻腔吸入中和Cm感染小鼠內(nèi)源性IL-17,以抗鼠IL-17單克隆抗體獨(dú)特型(IgG2a)作為對(duì)照。通過(guò)檢測(cè)小鼠體重變化、肺組織衣原體生長(zhǎng)及病理學(xué)改變,確定IL-17在衣原體肺感染中的保護(hù)作用。對(duì)支氣管肺泡灌洗液內(nèi)炎癥細(xì)胞進(jìn)行染色及分類計(jì)數(shù),確定IL-17對(duì)肺組織浸潤(rùn)的炎細(xì)胞類型的影響。最后,利用RT-PCR檢測(cè)IL-17對(duì)肺組織及小鼠肺上皮細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子/趨化性細(xì)胞因子及iNOS表達(dá)的影響,探討IL-17在小鼠衣原體肺感染中的保護(hù)作用機(jī)制。 結(jié)果： Cm呼吸道感染可誘導(dǎo)小鼠肺組織IL-17產(chǎn)生及脾臟Th17細(xì)胞擴(kuò)增。與給予獨(dú)特型抗體IgG2a的對(duì)照組比較,IL-17中和小鼠顯示嚴(yán)重的疾病狀態(tài),主要包括：明顯的體重降低、肺組織衣原體持續(xù)大量生長(zhǎng)及更為嚴(yán)重的肺組織病理學(xué)改變。IL-17中和小鼠支氣管肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞(PMN)百分率及絕對(duì)數(shù)量顯著下降,而淋巴及單核細(xì)胞百分率及絕對(duì)數(shù)量升高。IL-17中和小鼠肺組織與PMN趨化作用相關(guān)的因子,MIP-2及IL-6 mRNA表達(dá)顯著下降,而T細(xì)胞趨化因子RANTES表達(dá)上調(diào)；體外實(shí)驗(yàn)顯示,IL-17可協(xié)同TNF-a顯著上調(diào)小鼠肺上皮細(xì)胞(TC-1) MIP-2及IL-6表達(dá),但下調(diào)TNF-a誘導(dǎo)的RANTES表達(dá)。此外,IL-17可顯著上調(diào)小鼠肺組織及TC-1細(xì)胞iNOS表達(dá),并增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)NO產(chǎn)生,參與細(xì)胞內(nèi)抗衣原體反應(yīng)。 結(jié)論： 衣原體呼吸道感染可誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)IL-17產(chǎn)生及Th17細(xì)胞擴(kuò)增。IL-17在衣原體呼吸道感染中發(fā)揮重要保護(hù)作用。其作用機(jī)制包括：IL-17調(diào)節(jié)細(xì)胞因子/趨化性細(xì)胞因子在小鼠肺組織,尤其是肺上皮細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),誘導(dǎo)不同類型炎細(xì)胞在肺組織浸潤(rùn),參與炎性應(yīng)答的調(diào)節(jié)；其次,IL-17通過(guò)增強(qiáng)衣原體感染小鼠肺組織及肺上皮細(xì)胞iNOS表達(dá)及NO產(chǎn)生,直接參與細(xì)胞內(nèi)衣原體抑制。
【圖文】：

將1、IO3lFu的cm鼻腔吸入Balb/c小鼠。在規(guī)定的不同時(shí)間點(diǎn)處死小鼠后，利用RT-PCR及EUSA技術(shù)分別檢測(cè)小鼠肺組織IL一17的mRNA及蛋白表達(dá)。如圖1一1所示，在Cm感染后第2天，即可在小鼠肺組織檢測(cè)到IL一 17mRNA的表達(dá)，5一7天達(dá)高峰，14一21天顯著下降(圖1一1一A)。ELISA結(jié)果顯示，肺組織勻漿中IL一17蛋白在感染后第7天及14天均顯著增高(圖1一1一B)。以上結(jié)果提示，衣原體感染可有效誘導(dǎo)IL一17產(chǎn)生，而其mRNA及蛋白在感染后不同階段肺組織中的表達(dá)提示IL一17的固有性及獲得性來(lái)源。 1.2.2Cm感染誘導(dǎo)小鼠外周免疫器官IL.1丫CD曠T細(xì)胞(Th17細(xì)胞)的擴(kuò)增及IL一17產(chǎn)生取未感染小鼠及感染后第7天小鼠脾及肺縱隔淋巴結(jié)細(xì)胞

Day7Day14圖1一 3Cm肺感染后IL一17中和及I如Za對(duì)照小鼠體重變化(A)、肺組織衣原體生長(zhǎng)(B)、及病理變化(C)Figl一 3Bo勿 weight1055，， CmgrowthandPathologiealehangesinthe lungofIL一17一 eutralizedmieeandIgGZaeontrolmiee.括:(l)與對(duì)照組相比，IL一17中和小鼠體重下降更為明顯，并且在感染后第14天體重未見(jiàn)恢復(fù)，而IgGZa對(duì)照組小鼠體重逐漸恢復(fù)至正常水平(圖1一3一A)。(2)IL一17中和小鼠肺內(nèi)衣原體持續(xù)大量生長(zhǎng)，在感染后第7及14天肺組織衣原體活性均顯著高于IgGZa對(duì)照組。尤其在感染晚期，幾一17中和小鼠肺內(nèi)細(xì)菌滴度大約是IgGZa對(duì)照組小鼠的2000倍(圖1一3一B)，提示IL一17中和小鼠不能有效清除肺組織感染的衣原體。(3)肺病理學(xué)分析顯示
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Interleukin 17-Producing γδ T Cells Increased in Patients with Active Pulmonary Tuberculosis[J];Cellular & Molecular Immunology;2008年03期

本文編號(hào)：2520399