【摘要】： 建立理想的絨癌肺轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型是進(jìn)行絨癌肺轉(zhuǎn)移研究的重要基礎(chǔ)之一。本研究通過經(jīng)SCID小鼠尾靜脈注入人絨癌細(xì)胞株JEG-3,籍此建立一種較為符合臨床特征的人絨癌肺轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型。 第一部分基于靜脈注射腫瘤細(xì)胞的人絨癌SCID小鼠肺轉(zhuǎn)移模型的建立 目的:建立一種較為符合臨床特征的人絨癌肺轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型,并探索成功建立模型的合適的細(xì)胞濃度。方法:將40只4-5周齡SCID小鼠隨機(jī)分為4組(依注入的細(xì)胞濃度分為A組、B組、C組、D四組,每組各10只),將人絨癌細(xì)胞株JEG-3制成1×10~7細(xì)胞/ml,5×10~6細(xì)胞/ml,1×10~6細(xì)胞/ml三種濃度單細(xì)胞懸液。兩種濃度的細(xì)胞懸液經(jīng)SCID小鼠尾靜脈注入。A組每只注入1×10~7細(xì)胞/ml濃度的細(xì)胞0.1ml;B組每只注入5×10~6細(xì)胞/ml濃度的細(xì)胞0.2ml;C組每只注入1×10~6細(xì)胞/ml濃度的細(xì)胞0.1ml;D組設(shè)為正常對(duì)照組。每三天觀察一次小鼠狀態(tài),稱量一次小鼠的體重,當(dāng)小鼠處于瀕死狀態(tài)時(shí)用小動(dòng)物成像CT系統(tǒng)檢查肺部有無占位及數(shù)目,Micro CT檢查后,脫椎處死SCID小鼠,全身解剖,肉眼觀察各臟器有無腫瘤灶及雙側(cè)肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量,標(biāo)本制成病理切片顯微鏡下觀察。結(jié)果:A組:尾靜脈注射時(shí)全部死亡;B組:尾靜脈注射時(shí)死亡3只;存活的7只在18±2天時(shí),處于瀕死狀態(tài);體重在接種JEG-3細(xì)胞后最初12天迅速上升,此后體重迅速下降;Micro CT檢查,5/7肺部見到明顯的占位,每只肺部占位灶1-3個(gè),占位直徑1.5-3.5mm;肉眼下1/5見肝臟轉(zhuǎn)移灶,余SCID小鼠均未見其他臟器轉(zhuǎn)移灶,均未查見胸、腹水;病理切片證實(shí)為絨癌。C組:尾靜脈注射時(shí)死亡2只;存活的8只在30±2天時(shí),處于瀕死狀態(tài);體重在接種JEG-3細(xì)胞后在最初12天緩慢上升趨勢此后體重逐漸下降:Micro CT檢查肺部均未見到明顯的占位;肉眼下,2/8于頸部皮下觀察到5-10mm的紫藍(lán)色的轉(zhuǎn)移灶,其他臟器均未觀察到轉(zhuǎn)移灶,均未查見胸、腹水。D組小鼠的體重始終隨時(shí)間成逐步上升趨勢。結(jié)論:通過尾靜脈注射JEG-3細(xì)胞可以成功地建立SCID小鼠人絨癌肺轉(zhuǎn)移模型,5×10~6細(xì)胞/ml 0.2ml為建立模型的較為合適的細(xì)胞濃度、細(xì)胞數(shù)量。 第二部分SCID小鼠人絨癌實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的生物學(xué)特性的初步觀察 目的:初步觀察SCID小鼠人絨癌實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型的生物學(xué)特性。方法;對(duì)荷瘤肺組織的病理切片的特異性的抗原β-HCG進(jìn)行免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測,對(duì)新鮮的荷瘤肺組織進(jìn)行原代培養(yǎng),細(xì)胞純化及傳代,并記為JEG-3-LM細(xì)胞,對(duì)該細(xì)胞的特異性抗原β-HCG進(jìn)行免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測,及對(duì)其染色體進(jìn)行分析研究。結(jié)果:病理切片應(yīng)用人絨癌標(biāo)志物β-HCG進(jìn)行染色,呈陽性反應(yīng)。絨癌JEG-3-LM傳至第5代,成纖維細(xì)胞基本去除,目前傳至第15代;JEG-3-LM呈單層上皮樣生長,細(xì)胞形態(tài)呈典型的上皮樣細(xì)胞,平均三四天傳一代。應(yīng)用人絨癌標(biāo)志物β-HCG進(jìn)行染色,JEG-3-LM細(xì)胞全部呈陽性反應(yīng)。JEB-3-LM染色體核型分析為人源性單體、三體和多體染色體,細(xì)胞染色體數(shù)目19-128條,染色體眾數(shù)70-79條。結(jié)論:JEG-3-LM細(xì)胞為人源性絨癌細(xì)胞。 總之本研究以人絨癌細(xì)胞系JEG-3為研究材料、以SCID小鼠為宿主動(dòng)物,經(jīng)尾靜脈注射腫瘤細(xì)胞成功地建立人絨癌SCID小鼠肺轉(zhuǎn)移模型,并對(duì)該模型的生物學(xué)特性進(jìn)行了初步觀察。目前在文獻(xiàn)中尚未見到以SCID小鼠為宿主動(dòng)物,通過尾靜脈注射腫瘤細(xì)胞建立實(shí)驗(yàn)性絨癌肺轉(zhuǎn)移模型的報(bào)道。
【圖文】：

圖2SCID小鼠接種JEG一3細(xì)胞后體重變化側(cè)小動(dòng)物CT成像系統(tǒng)檢查雙肺轉(zhuǎn)移灶情況B組:7只中5只見到明顯的占位，每只肺部占位灶1一3個(gè)，占位直徑1.5一3.smfn(圖3)。C組:8只中均未見到明顯的占位。

圖3SCID小鼠肺部CT身解剖后肺臟轉(zhuǎn)移情況和其他臟器轉(zhuǎn)的7只小鼠中5/7肉眼卜見紫藍(lán)色的度)，1一3個(gè)肺轉(zhuǎn)移灶/只，，直徑3一Slnln囊性區(qū)，囊性區(qū)內(nèi)含陳舊性咖啡色液體的8只小鼠中肉眼下均未觀察到肺部
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R-332;R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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1 姚開泰,潘世[

本文編號(hào)：2519036