【摘要】：血供再通治療是目前缺血性心臟病的主要治療手段。在血供再通治療中缺血再灌注損傷是普遍存在的病理變化。它涉及氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等環(huán)節(jié),嚴(yán)重影響了血供再通治療的效果。如何在冠脈血運(yùn)重建治療中保護(hù)心臟,避免缺血再灌注損傷已經(jīng)成為心血管研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。 目前這個(gè)領(lǐng)域中一個(gè)主要的研究方向是利用預(yù)處理的方法喚起心臟內(nèi)在的保護(hù)信號(hào)通路。預(yù)處理的主要方法包括缺血前處理和缺血后處理,但是它們各自的特點(diǎn)限制了臨床上的應(yīng)用。利用藥物模擬預(yù)處理對(duì)心肌的保護(hù)機(jī)制是另一種積極的探索,其中粒細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF)是主要候選藥物之一。然而,G-CSF 1臨床試驗(yàn)結(jié)果的不一致提示復(fù)雜的臨床背景可能影響了G-CSF對(duì)心臟的保護(hù)效果,因此對(duì)G-CSF在病理環(huán)境下的作用機(jī)制進(jìn)行更加深入的研究尤其重要。 熱休克因子1(Heat Shock Factor 1, HSF1)及其調(diào)節(jié)的熱休克反應(yīng)是機(jī)體對(duì)抗各種損傷的重要內(nèi)在保護(hù)機(jī)制。HSF1可以激活多種熱休克蛋白,它們具有多種功能,可以充當(dāng)分子伴侶,幫助蛋白折疊、轉(zhuǎn)運(yùn),在生長(zhǎng)、發(fā)育、炎癥等多種病理生理過(guò)程中都發(fā)揮了重要作用。 已有研究發(fā)現(xiàn)HSF1在心臟缺血再灌注損傷中可以發(fā)揮抗凋亡、抗炎癥、增加心肌舒縮能力等多種作用。同時(shí),在各種不同的病理狀態(tài)下,或是各種臨床藥物的干預(yù)下,HSF1的表達(dá)水平和活性狀態(tài)都會(huì)發(fā)生變化。 目前G-CSF對(duì)心臟的預(yù)處理保護(hù)機(jī)制主要集中在活化內(nèi)源性的保護(hù)激酶。作為一種重要的內(nèi)源保護(hù)性因子,HSF1是否參與了G-CSF對(duì)心臟的保護(hù)作用,還有待進(jìn)一步闡明。這在很大程度上有助于揭示G-CSF在臨床應(yīng)用中效果不一致的原因,并更深入的理解G-CSF對(duì)心臟保護(hù)作用的機(jī)制。 第一部分心臟缺血再灌注損傷中HSF1是G-CSF保護(hù)作用重要的信號(hào)分子 假設(shè)：粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)能夠通過(guò)激活心臟內(nèi)的保護(hù)激酶在缺血再灌注損傷中保護(hù)心臟。熱休克因子1 (HSF1)是心臟缺血再灌注損傷中重要的內(nèi)在保護(hù)因子,有可能也參與了G-CSF對(duì)心臟的保護(hù)作用。 目的：本部分實(shí)驗(yàn)是為了研究HSF1是否參與了G-CSF對(duì)心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制。 方法：(1)以同窩的野生型小鼠做對(duì)照,在HSF1基因敲除小鼠上連續(xù)3天皮下給予G-CSF (100μg/kg/day),然后通過(guò)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支,缺血30分鐘后再灌注24小時(shí)。通過(guò)超聲、血流動(dòng)力學(xué)和組織染色的方法,評(píng)價(jià)心功能和心臟梗死范圍。(2)在原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞給予G-CSF,并將HSF1的siRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞,經(jīng)由過(guò)氧化氫刺激24小時(shí),通過(guò)AnnexinⅤ染色,觀察G-CSF減少心肌細(xì)胞凋亡的情況,并比較HSF1siRNA干擾后是否影響G-CSF對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。 結(jié)果：(1)在野生型小鼠中,給予G-CSF能夠明顯改善心功能,降低梗死面積；而在HSF1敲除小鼠中,G-CSF對(duì)心臟的保護(hù)作用消失。(2)在未進(jìn)行HSF1 RNA干擾的心肌細(xì)胞中,給予G-CSF能夠顯著減少過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的凋亡；而當(dāng)HSF1表達(dá)水平下降后(RNA干擾組),G-CSF不能減少心肌細(xì)胞的凋亡 結(jié)論：HSF1參與了G-CSF對(duì)缺血再灌注損傷中心臟的保護(hù)作用并發(fā)揮了重要作用。 第二部分HSF1/STAT3是G-CSF對(duì)缺血再灌注損傷心臟保護(hù)作用的重要信號(hào)通路 假設(shè)：粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)能夠通過(guò)Jak2/STAT3信號(hào)通路減少缺血再灌注對(duì)心臟的損害。熱休克因子1 (HSF1)是心臟的內(nèi)在保護(hù)因子之一,有可能與STAT家族相互作用。 目的：研究心臟缺血再灌注損傷中,G-CSF的保護(hù)作用是否與HSF1和STAT3的相互作用相關(guān)。 方法：(1)在心臟體外灌流模型和培養(yǎng)的心肌細(xì)胞中檢測(cè)HSF1表達(dá)水平和活性與施加G-CSF的關(guān)系。(2)在乳鼠心肌細(xì)胞中觀察G-CSF對(duì)STAT3磷酸化的作用。(3)在抑制STAT3活性的情況下,觀察G-CSF對(duì)HSF1的作用是否發(fā)生變化。(4)分別在降低HSF1表達(dá)水平和抑制HSF1活性的情況下,觀察G-CSF對(duì)STAT3的活化是否改變。(5)通過(guò)免疫共沉淀技術(shù),觀察HSF1和STAT3的相互作用。 結(jié)果：(1)在體外灌流心臟中,缺血再灌注損傷和G-CSF處理并不改變HSF1的轉(zhuǎn)錄水平；利用G-CSF處理乳鼠心肌細(xì)胞,HSF1 mRNA水平并不隨時(shí)間變化而變化,但是可以增加HSF1的磷酸化(Ser230)水平,進(jìn)而促進(jìn)熱休克蛋白(HSP)的生成。(2)G-CSF可以活化心肌細(xì)胞中的STAT3,并呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。(3)用S3I-201抑制STAT3的活性后,G-CSF對(duì)HSF1的活化明顯被削弱。(4)分別采用RNA干擾HSF1和用KNK437抑制HSF1的方法,觀察到G-CSF對(duì)STAT3的激活明顯減弱。(5)進(jìn)一步的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),HSF1和STAT3存在相互作用,G-CSF處理后兩者結(jié)合增加,這種變化可以被各自的抑制劑所抑制。 結(jié)論：G-CSF在缺血再灌注損傷中并不改變HSF1的表達(dá)水平,而是通過(guò)提高HSF1活性的方式增強(qiáng)心肌細(xì)胞的內(nèi)在保護(hù)機(jī)制；HSF1和STAT3可能通過(guò)直接結(jié)合,在G-CSF作用下以共激活因子的形式發(fā)揮保護(hù)作用。 重要性和創(chuàng)新點(diǎn) 1)揭示了在心臟缺血再灌注損傷中,G-CSF藥物預(yù)處理的保護(hù)機(jī)制與熱休克因子1 (HSF1)及其調(diào)控的熱休克反應(yīng)相關(guān)。HSF1的表達(dá)水平和活性狀態(tài)直接關(guān)系到G-CSF對(duì)心臟保護(hù)作用的效果。 2)將心肌細(xì)胞內(nèi)在的HSF1保護(hù)機(jī)制和預(yù)處理中保護(hù)激酶(RISK)信號(hào)通路中的STAT3聯(lián)系在一起,對(duì)預(yù)處理保護(hù)機(jī)制的分子網(wǎng)絡(luò)起到一定完善作用。 3)明確了HSF1與STAT3是G-CSF預(yù)處理保護(hù)機(jī)制中一對(duì)重要的調(diào)節(jié)因子,并且不同于以往的觀點(diǎn),STAT3不但是缺血晚期反應(yīng)的重要的信號(hào)分子,還可能通過(guò)HSF1在再灌注早期也發(fā)揮保護(hù)作用。 4)針對(duì)G-CSF臨床試驗(yàn)與基礎(chǔ)研究中保護(hù)效果的不一致,根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,提出了一種假設(shè),即復(fù)雜的臨床背景干擾了HSF1在機(jī)體內(nèi)的狀況,G-CSF無(wú)法正常喚起心臟內(nèi)在的保護(hù)機(jī)制,造成臨床治療效果的不一致。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R363.22

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱春艷;劉寶;周樹(shù)生;李矗;沈建軍;;不同高壓氧預(yù)處理對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的研究[J];安徽醫(yī)藥;2011年07期

2 韓江全;于奎營(yíng);胡泳濤;林冬融;黃名璐;;bFGF對(duì)大鼠腦缺血再灌注后神經(jīng)元凋亡及fractalkine表達(dá)的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2011年06期

3 張慧芝;白建平;于肯明;史婷婷;;芹菜素預(yù)處理對(duì)缺血再灌注大鼠心肌腫瘤壞死因子-α表達(dá)的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2011年07期

4 劉志強(qiáng);崔利德;;生酮飲食對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)[J];職業(yè)與健康;2011年15期

5 張郁林;黃燁;周波;楊衛(wèi)東;聶軍;李奎;萬(wàn)沛;;缺血預(yù)處理對(duì)肺缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué);2011年04期

6 陳瑞娟;芮慶林;;中醫(yī)藥對(duì)缺血再灌注線粒體損傷的保護(hù)作用[J];中國(guó)中醫(yī)急癥;2011年09期

7 劉利;陳麗;王興會(huì);;氯丙嗪預(yù)處理對(duì)家兔缺血再灌注損傷后小腸功能的影響[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

8 曾敏;顏紅兵;;核因子-κB與心肌缺血再灌注后無(wú)復(fù)流[J];中國(guó)循環(huán)雜志;2011年04期

9 王國(guó)華;姜國(guó)忠;殷響;;前列地爾和缺血后處理對(duì)兔下肢急性缺血再灌注損傷影響的試驗(yàn)觀察[J];牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年03期

10 董長(zhǎng)生;孫輝平;劉衛(wèi)珍;楊金鳳;;奧曲肽預(yù)處理對(duì)兔肝缺血再灌注后腦組織損傷的影響[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2011年16期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 李濤;張虹;李貴剛;胡維琨;;地塞米松對(duì)大鼠缺血再灌注損傷視網(wǎng)膜中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白—1表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

2 鄭衛(wèi)紅;錢(qián)京萍;;阿斯咪唑?qū)Υ笫箅x體心臟缺血再灌注損傷的影響[A];第七屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2009年

3 劉修恒;陳暉;詹炳炎;周江橋;祝恒成;陳志遠(yuǎn);;缺血后處理對(duì)腎缺血再灌注損傷炎癥的影響[A];第十五屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

4 劉敏;張煒;顧民;呂強(qiáng);徐東亮;韓志堅(jiān);;Eritoran對(duì)大鼠腎臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[A];第十六屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

5 劉德強(qiáng);趙德化;盛寶恒;;呋喃二氫吡啶Ⅰ對(duì)離體兔心缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[A];第二屆全國(guó)心功能學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];1990年

6 姚潔潔;詹維偉;陳林;劉振華;陳曼;周建橋;;超聲造影評(píng)估兔缺血再灌注損傷腎皮質(zhì)與錐體血流灌注差異[A];第二屆長(zhǎng)三角超聲醫(yī)學(xué)論壇暨2009年浙江省超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

7 方顯明;楊建設(shè);肖柳華;劉鈞超;;益心脈顆粒對(duì)缺血再灌注損傷心肌超微結(jié)構(gòu)保護(hù)作用的研究[A];第五次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合血瘀證及活血化瘀研究學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2001年

8 李俊龍;孫則禹;陳明;張古田;顧曉箭;;紅景天甙對(duì)大鼠腎臟熱缺血再灌注損傷的保護(hù)作用的試驗(yàn)研究[A];第五次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

9 姚俊巖;李士通;;異丙酚與缺血再灌注損傷[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國(guó)麻醉學(xué)術(shù)年會(huì)知識(shí)更新講座[C];2006年

10 王祖峰;溫端改;侯健全;嚴(yán)舂寅;歐陽(yáng)駿;浦金賢;潘浩;;慢病毒介導(dǎo)的iNOS siRNA對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[A];第十五屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 萬(wàn)同己;缺血再灌注損傷的藥物干預(yù)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

2 梁日欣 肖永慶 高偉;川芎內(nèi)酯A具抗心肌缺血作用[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

3 張茨;扭轉(zhuǎn)的睪丸切還是�！t(yī)生有新說(shuō)[N];健康報(bào);2005年

4 燕海霞 王憶勤 李福鳳;川芎嗪在腎臟病中應(yīng)用前景看好[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

5 本報(bào)記者　 林智嵐 謝振華 何彪 康金龍 黃金清 黃建林 姚瑾 何金 邱錦溪 李紹鶴 劉美楨;海西建設(shè)中的福建婦女[N];福建日?qǐng)?bào);2006年

6 張中橋;西京醫(yī)院首次建立神經(jīng)干細(xì)胞移植實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

7 楊嘉珍邋歐陽(yáng)作憲;葛根素對(duì)腦細(xì)胞損傷有保護(hù)作用[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2008年

8 徐杰 竇若蘭 蔣與剛;丹參腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)危重患者腸屏障功能有保護(hù)作用[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

9 羅剛;腎臟衰老研究多點(diǎn)突破[N];健康報(bào);2006年

10 記者 鄭福漢 見(jiàn)習(xí)記者 甘青;執(zhí)著的追求[N];咸寧日?qǐng)?bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 馬宏;熱休克因子1參與粒細(xì)胞集落刺激因子對(duì)心臟缺血再灌注保護(hù)作用的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

2 劉鳳鳴;巰甲丙脯酸停跳液對(duì)低溫缺血再灌注離體兔心的保護(hù)作用[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1992年

3 李舒媛;聚集素蛋白（Clusterin）在心臟移植冷缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用與機(jī)理研究[D];華中科技大學(xué);2011年

4 曹澤玲;靶向PPARγ抗心肌缺血再灌注損傷的作用特征[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

5 金歡勝;HSP70介導(dǎo)腎臟缺血預(yù)適應(yīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 賀曉楠;腺苷對(duì)缺血再灌注心肌的保護(hù)作用[D];吉林大學(xué);2007年

7 江浪清;缺血后處理對(duì)同種異體大鼠胰腺移植缺血再灌注損傷保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2008年

8 張召輝;缺血后處理對(duì)大鼠移植胰腺缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

9 吳錦波;促紅細(xì)胞生成素在大鼠心肌缺血再灌注損傷中的保護(hù)性作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

10 王夢(mèng)]};Exendin-4對(duì)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元缺血再灌注損傷后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)性細(xì)胞凋亡的影響[D];華中科技大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 韋克;亞低溫對(duì)兔小腸缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2005年

2 安肖霞;抑肽酶對(duì)肺缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究[D];浙江大學(xué);2006年

3 高穎;兔心肌缺血與再灌注過(guò)程對(duì)心電圖QRS合值及心肌酶的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2006年

4 李俠;異丙酚對(duì)肝臟缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

5 許建新;NF-κB抑制劑對(duì)大鼠肺移植缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

6 俞煒;甲基強(qiáng)的松龍?jiān)谛膬?nèi)直視手術(shù)中的應(yīng)用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

7 靖智利;七氟醚對(duì)大鼠急性腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[D];中南大學(xué);2009年

8 趙黎丙;缺血再灌注損傷上調(diào)心肌組織Pim-3基因的表達(dá)[D];華中科技大學(xué);2010年

9 楊永麗;rHuEPO預(yù)處理對(duì)HK-2細(xì)胞缺血再灌注損傷中PI3K/Akt/GSK-3β通路的調(diào)控作用[D];華中科技大學(xué);2010年

10 楊鐵軍;燈盞細(xì)辛對(duì)大鼠腎冷缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響[D];鄭州大學(xué);2005年

，

本文編號(hào)：2479556