【摘要】：目的對比分析泛素對正常狀態(tài)下的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)和巨噬細(xì)胞的影響及其差別,并評價泛素是否對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的HUVECs損傷具有保護(hù)作用。方法在顯微鏡下觀察不同濃度泛素干預(yù)后HUVECs細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化。將體外培養(yǎng)的HUVECs和人巨噬細(xì)胞分為空白對照組和4個泛素干預(yù)組(0.01μg/m L組、0.1μg/m L組、1μg/m L組和10μg/m L組),ELISA法測定干預(yù)后24 h各組細(xì)胞上清腫瘤壞死因子α(TNF-α)和血管細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1)水平,Western blot法測定細(xì)胞核因子κB(NF-κB)蛋白水平。用0.1μg/m L泛素干預(yù)10μg/m L LPS誘導(dǎo)的HUVECs,ELISA法測定8、16和24 h泛素+LPS組和LPS組細(xì)胞上清TNF-α和VCAM-1水平。結(jié)果隨著泛素干預(yù)濃度的增加,HUVECs損傷的程度逐步加重,當(dāng)泛素濃度達(dá)到50μg/m L時,細(xì)胞開始呈氣球樣變并大量死亡。隨著泛素干預(yù)濃度的升高,HUVECs細(xì)胞上清TNF-α和VCAM-1水平呈先升高后降低的變化趨勢,而人巨噬細(xì)胞的TNF-α和VCAM-1水平則是呈逐步升高的趨勢;HUVECs和人巨噬細(xì)胞NF-κB蛋白水平在泛素濃度為0.1μg/m L和1μg/m L時明顯增高,而在0.01μg/m L和10μg/m L時增高不明顯,甚至有減低的趨勢,其中HUVECs減低的趨勢更為明顯。0.1μg/m L泛素干預(yù)10μg/m L LPS誘導(dǎo)的HUVECs,各時間點LPS組和泛素+LPS組的TNF-α和VCAM-1水平相似,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論較低濃度的泛素對HUVECs即有明顯的損傷作用,而人巨噬細(xì)胞則需要較高的泛素濃度才出現(xiàn)損傷。泛素對體外培養(yǎng)的LPS誘導(dǎo)的HUVECs損傷不具有明顯的保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective to compare and analyze the effects and differences of ubiquitin on (HUVECs) and macrophages in normal human umbilical vein endothelial cells (umbilical vein endothelial cells), and to evaluate whether ubiquitin has protective effect on HUVECs damage induced by lipopolysaccharide (LPS). Methods the morphological changes of HUVECs cells treated with different concentrations of ubiquitin were observed under microscope. HUVECs and human macrophages cultured in vitro were divided into blank control group and four ubiquitin intervention groups (0.01 渭 g / mL group, 0.1 渭 g / mL group, 1 渭 g / mL group and 10 渭 g / mL group). The levels of tumor necrosis factor 偽 (TNF- 偽) and vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1) were measured by ELISA assay 24 hours after intervention. The levels of nuclear factor kappa B (NF- kappa B) protein were measured by, Western blot assay. HUVECs,ELISA assay induced by 0.1 渭 g / mL ubiquitin in 10 渭 g / m L LPS was used to determine the levels of TNF- 偽 and VCAM-1 in the cells of ubiquitin LPS group and LPS group at 16 h and 24 h. Results with the increase of the concentration of ubiquitin, the degree of HUVECs damage was gradually aggravated. When the concentration of ubiquitin reached 50 渭 g / mL, the cells began to become balloon-like and died a lot. With the increase of ubiquitin concentration, the levels of TNF- 偽 and VCAM-1 in HUVECs cells increased at first and then decreased, while the levels of TNF- 偽 and VCAM-1 in human macrophages increased gradually. The levels of NF- 魏 B protein in HUVECs and human macrophages increased significantly when the concentration of ubiquitin was 0.1 渭 g / mL and 1 渭 g / mL, but not at 0.01 渭 g / mL and 10 渭 g / mL, and even decreased at 0.01 渭 g / mL and 10 渭 g / mL. The decrease trend of HUVECs was more obvious. The levels of TNF- 偽 and VCAM-1 in LPS group and ubiquitin LPS group induced by 0.1 渭 g / mL ubiquitin at 10 渭 g / m L LPS were similar at each time point, but there was no significant difference. Conclusion low concentration of ubiquitin has obvious damage effect on HUVECs, while human macrophages need higher concentration of ubiquitin. Ubiquitin has no obvious protective effect on HUVECs damage induced by LPS in vitro.
【作者單位】： 南京明基醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科;南京明基醫(yī)院胸腔醫(yī)學(xué)中心;
【基金】：南京醫(yī)科大學(xué)科技發(fā)展基金面上項目(編號:2011NJMU076)
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2475634