【摘要】： 目的自1879年,Ringer在臺灣從一具葡萄牙水手尸體肺臟內(nèi)首次檢出并殖吸蟲,至今人類研究已經(jīng)有120多年的歷史。并殖吸蟲種類很多,世界各地報道達50多種(含種、亞種、變種和同種異名等),廣泛分布于東亞、東南亞、非洲和拉丁美洲等國家,在我國并殖吸蟲報道有30種之多(含種、亞種、變種和同種異名等),分布于全國各地,尤其在江南、西南和東北各省山區(qū)等地。并殖吸蟲種類命名存在如同種異名、種名錯定等諸多問題,主要與60年代以前單一以傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)為依據(jù)和60~80年代并殖吸蟲分類研究中的一點浮躁表現(xiàn)有關(guān)。因此澄清并殖吸蟲的分類學(xué)地位,不僅對充實與修訂并殖吸蟲分類學(xué)有理論意義,而且尚可為并殖吸蟲的臨床醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)和流行病學(xué)監(jiān)控與制定防治策略提供參考。90年代以來,分子生物學(xué)技術(shù)廣泛應(yīng)用于物種的遺傳變異和分類,直接從DNA水平反映基因本身,具有優(yōu)越性。因此,傳統(tǒng)分類學(xué)結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)方法分類是目前被普遍接受的一種分類方式。本實驗結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察和RAPD技術(shù)對我國湖北、江西、浙江等地的11株并殖吸蟲進行研究,以了解其遺傳變異情況,為并殖吸蟲分類提供依據(jù),尤其對湖北省并殖吸蟲流行區(qū)劃分提供分子生物學(xué)依據(jù)。此外,探討采用不同蟲期標本(成蟲和囊蚴)及其不同保存方法(10%福爾馬林或-20℃冷藏)對該研究的影響。 材料與方法收集我國湖北省咸寧市溫泉區(qū)、江西省武寧縣、浙江省紹興蘭亭鄉(xiāng)、湖北省赤壁市趙李橋鎮(zhèn)、湖北省十堰市區(qū)、湖北省五峰縣、湖北省鶴峰縣五里鎮(zhèn)、湖北省鶴峰縣走馬鎮(zhèn)、湖北省神農(nóng)架林區(qū)3省9地的11株并殖吸蟲。其中湖北省咸寧市溫泉區(qū)、江西省武寧縣、浙江省紹興蘭亭鄉(xiāng)和湖北十堰市區(qū)4地的標本為成蟲,依地名分別稱:湖北溫泉、江西武寧、浙江蘭亭、湖北十堰;其余5地標本為囊蚴,其中在五峰縣和鶴峰縣走馬鎮(zhèn)的同一淡水蟹發(fā)現(xiàn)有大小兩種囊蚴,依據(jù)大小分別稱五峰(a)、五峰(b)、走馬(a)、走馬(b),余3株依地名分別稱:湖北赤壁、湖北五里、湖北神農(nóng)架。1.外形觀察:肉眼觀察成蟲外形,體視顯微鏡觀察囊蚴的形態(tài)并作記錄;2. DNA提取:采取不同方法提取不同標本基因組DNA;3.RAPD-PCR技術(shù):分別擴增上述并殖吸蟲的基因組DNA,根據(jù)擴增的結(jié)果,計算各株并殖吸蟲間的遺傳距離和相似系數(shù),并采用SPSS11.0軟件的Between-groups linkage法對所得二元數(shù)據(jù)進行聚類分析,繪制系統(tǒng)進化樹。 結(jié)果1.外形觀察:成蟲湖北十堰株呈長梭形,湖北溫泉、江西武寧和浙江蘭亭等3株呈橢圓形;囊蚴呈圓形或類圓形,囊壁兩層,排泄囊內(nèi)含黑色顆粒,鑒定為并殖吸蟲囊蚴。其中湖北赤壁株內(nèi)壁較厚;五峰(a)、五峰(b)、走馬(a)、走馬(b)和五里等5株內(nèi)壁較薄;湖北神農(nóng)架株,囊蚴形態(tài)因故已有些變形,但可以確定為并殖吸蟲囊蚴。2.DNA提取:DNA溶液A260/A280值經(jīng)測定在1.60～2.00之間,純度符合要求。3.RAPD-PCR:①各株間差異湖北溫泉、江西武寧、浙江蘭亭和湖北赤壁4株遺傳距離在0.1034～0.1930;湖北走馬(a)、湖北走馬(b)、湖北五峰(a)、湖北五峰(b)、湖北十堰和湖北五里等鄂西6株遺傳距離在0.1233～0.3000,其中湖北走馬2株擴增帶型具有較大相似性,相似系數(shù)為0.8182,遺傳距離為0.1818,湖北五峰2株擴增帶型也具有較大相似性,相似系數(shù)0.8767,遺傳距離僅為0.1233。湖北神農(nóng)架株與各株遺傳距離在0.2329～0.4154,其與湖北溫泉、江西武寧、浙江蘭亭和湖北赤壁4株遺傳距離在0.3333～0.4154,與余6株遺傳距離在0.2329～0.3731。②系統(tǒng)進化樹在SPSS構(gòu)建的系統(tǒng)進化樹中11株并殖吸蟲分為3類:江西武寧、浙江蘭亭、湖北溫泉和湖北赤壁等株為一類;湖北走馬(a)、湖北走馬(b)、湖北五峰(a)、湖北五峰(b)、湖北十堰和湖北五里等株為一類;湖北神農(nóng)架株為另一類。4.湖北省主要有兩個并殖吸蟲流行區(qū):以衛(wèi)氏并殖吸蟲為主的鄂東南區(qū);以斯氏并殖吸蟲為主的鄂西區(qū)。 結(jié)論1.根據(jù)RAPD-PCR的實驗結(jié)果,3省11株并殖吸蟲在基因水平分為3類:①江西武寧、浙江蘭亭、湖北溫泉和湖北赤壁;②湖北走馬(a)、湖北走馬(b)、湖北五峰(a)、湖北五峰(b)、湖北十堰和湖北五里;③湖北神農(nóng)架。2.湖北省存在以衛(wèi)氏并殖吸蟲為主的鄂東南和以斯氏并殖吸蟲為主的鄂西兩個流行區(qū)。3.采用不同蟲期(成蟲和囊蚴)標本及其不同保存方法(10%福爾馬林或-20℃冷藏)不影響遺傳變異研究的結(jié)果。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R383.2

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本文編號：2423226