發(fā)布時(shí)間：2019-01-02 07:10

【摘要】：缺氧再?gòu)?fù)氧(anoxia-reoxygenation, A/R)是指細(xì)胞在缺乏氧供應(yīng)一段時(shí)間之后恢復(fù)供氧的過(guò)程,在恢復(fù)氧供應(yīng)初期的短暫時(shí)間內(nèi),經(jīng)歷缺氧損傷的細(xì)胞不僅沒(méi)有減輕損傷,反而加重?fù)p傷,這種現(xiàn)象稱為缺氧再?gòu)?fù)氧損傷。臨床上多種缺血性心、腦血管疾病都伴有相應(yīng)器官和組織的缺血再灌注損傷,缺血再灌注損傷也是多種缺血性心、腦血管疾病共有的病理生理學(xué)基礎(chǔ)。缺血再灌注是對(duì)于有血液供應(yīng)的組織和/或器官而言,而對(duì)于無(wú)血液供應(yīng)的細(xì)胞來(lái)說(shuō)則是缺氧再?gòu)?fù)氧。缺氧再?gòu)?fù)氧發(fā)生后最明顯的變化是產(chǎn)生大量的活性氧,引起脂質(zhì)過(guò)氧化,造成細(xì)胞損傷,嚴(yán)重者導(dǎo)致細(xì)胞整體被破壞。 缺氧再?gòu)?fù)氧或缺血再灌注除涉及脂質(zhì)過(guò)氧化外,凝血和炎癥等病理過(guò)程也參與了缺氧再?gòu)?fù)氧或缺血再灌注。TF作為外源性凝血系統(tǒng)的啟動(dòng)者,是凝血系統(tǒng)中唯一的細(xì)胞膜蛋白。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),TF除參與凝血過(guò)程外,還作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子介導(dǎo)腫瘤、胚胎發(fā)育、血管新生、炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化形成等多種病理生理過(guò)程。由此可見(jiàn),TF在缺氧再?gòu)?fù)氧(缺血再灌注)損傷的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能起一定的作用。那么TF在缺氧再?gòu)?fù)氧(缺血再灌注)損傷過(guò)程中如何起作用?起什么作用?目前尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。本研究以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為研究對(duì)象,經(jīng)過(guò)體外的缺氧再?gòu)?fù)氧過(guò)程,觀察了TF在缺氧再?gòu)?fù)氧過(guò)程中的作用,并就其機(jī)制進(jìn)行了初步探討。 [目的]研究組織因子在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)缺氧再?gòu)?fù)氧損傷中的作用,并探討其機(jī)制。 [方法]HUVECs隨機(jī)等分成正常對(duì)照組、缺氧再?gòu)?fù)氧組(A/R)、反義寡脫氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide, aODN/TF)+缺氧再?gòu)?fù)氧組(aODN/TF+A/R組)、正義寡脫氧核苷酸(sense oligodeoxynucleotide, sODN/TF)+缺氧再?gòu)?fù)氧組(sODN/TF+A/R組)以及錯(cuò)配寡脫氧核苷酸(mismatched oligodeoxynucleotide, mODN/TF)+缺氧再?gòu)?fù)氧組(mODN/TF+A/R組),3個(gè)寡脫氧核苷酸組的HUVECs分別轉(zhuǎn)染aODN/TF、sODN/TF和mODN/TF。4個(gè)缺氧再?gòu)?fù)氧組的HUVECs經(jīng)歷3小時(shí)的缺氧,繼以2小時(shí)的再?gòu)?fù)氧。收集各組HUVEC,用體外細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄檢測(cè)TFmRNA。一期凝血法測(cè)定TF促凝活性(tissue factor procoagulant activity, TF:C),酶聯(lián)免疫吸附方法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)TF抗原(tissue factor antigen, TF:Ag)的含量。并檢測(cè)HUVECs的活性、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)、丙二醛(malonaldehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathion peroxidase, GSH-PX)、一氧化氮(nitric oxide, NO)和內(nèi)皮素-1(endothelin-1, ET-1)的含量。 另將HUVECs隨機(jī)等分為正常對(duì)照組、缺氧再?gòu)?fù)氧組(A/R)和滅活FVIIa+缺氧再?gòu)?fù)氧組(FVIIai+A/R組)。FVIIai+A/R組在HUVECs培養(yǎng)基中加入1,5-丹酰-谷氨酰-甘氨酰-精氨酰氯甲酰酮(DEGRck)滅活的人凝血因子Ⅶa(終濃度200nM)。A/R組和FVIIai+A/R組HUVECs經(jīng)過(guò)缺氧再?gòu)?fù)氧后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)、凝血酶激活受體-1(proteinase activated receptor-1, PAR-1)、凝血酶激活受體-2(proteinase activated receptor-2, PAR-2)、磷酸化p38有絲分裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen activated protein kinases, phospho-p38 MAP kinase)和磷酸化p42/44有絲分裂原活化蛋白激酶(phospho-p42/44 mitogen activated protein kinases, phospho-p42/44 MAP kinase)的相對(duì)含量。 [結(jié)果]缺氧再?gòu)?fù)氧之后,TF表達(dá)在mRNA及蛋白質(zhì)水平方面均有增加,細(xì)胞活力、SOD、GSH-PX和NO的含量均減少,而LDH, MDA及ET-1的表達(dá)增加(與正常對(duì)照組相比P0.05～0.001)。aODN/TF+ A/R組HUVEC中的TF表達(dá)被抑制,細(xì)胞活力、SOD、GSH-PX和NO下降的程度較A/R組減小,LDH、MDA及ET-1增加的程度較A/R組減小(與A/R組相比P0.05～0.01)。缺氧再?gòu)?fù)氧之后,流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)顯示,ROS、PAR-1、PAR-2及p38 MAP激酶和p42/44 MAP激酶均不同程度的激活(與正常對(duì)照組相比,P0.001), FVIIai能夠抑制缺氧再?gòu)?fù)氧過(guò)程中ROS、PAR-1、PAR-2及p38 MAP激酶和p42/44 MAP激酶的激活,并改善缺氧再?gòu)?fù)氧過(guò)程中TF:C、MDA、SOD、GSH-PX、細(xì)胞活力和LDH的變化(與A/R組相比,P0.05～0.001)。 [結(jié)論]在缺氧再?gòu)?fù)氧損傷過(guò)程中,TF不僅介導(dǎo)了凝血過(guò)程,而且通過(guò)激活PAR-1、PAR-2、p38 MAP激酶和p42/44 MAP激酶誘發(fā)了炎癥反應(yīng),從而加重了細(xì)胞損傷。因而TF是缺氧再?gòu)?fù)氧損傷的“中心分子”,它將缺氧再?gòu)?fù)氧、凝血和炎癥等病理過(guò)程聯(lián)系在了一起,形成一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)。本研究對(duì)完善缺氧再?gòu)?fù)氧和缺血再灌注損傷的機(jī)制提供了重要依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：汕頭大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2398165