【摘要】： 目的:構(gòu)建LPS誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞炎癥損傷模型,觀察αBC對(duì)LPS誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用,并闡明其可能機(jī)制。 方法:1.將大鼠心肌H9c2細(xì)胞于42.5℃水浴箱中熱休克1h,然后恢復(fù)37℃,5%CO_2恒溫培養(yǎng)0min,30min,60min,6h,12h,24h后收集細(xì)胞,并收集未作熱休克處理的細(xì)胞作為對(duì)照,免疫印跡檢測(cè)Hsp25,Hsp27,Hsp90以及αBC的表達(dá)。 2.(1)對(duì)高表達(dá)αBC的大鼠心肌細(xì)胞以及野生型大鼠心肌細(xì)胞,采用LPS(100ng/ml)分別培養(yǎng)30min,1h,2h,同時(shí)采用未加入LPS刺激的細(xì)胞作為空白對(duì)照,提取蛋白用于免疫印跡檢測(cè)IκB激活。(2)對(duì)H9c2大鼠心肌細(xì)胞株瞬時(shí)轉(zhuǎn)染NFκB-luc質(zhì)粒、pRL-SV40質(zhì)粒、PCI或PCI-αBC質(zhì)粒,采用LPS(100ng/ml)培養(yǎng)2h后收集細(xì)胞,同時(shí)將未加入LPS刺激的細(xì)胞作為空白對(duì)照,進(jìn)行NF-κB報(bào)告基因活性的檢測(cè)。 3.對(duì)高表達(dá)αBC的大鼠心肌細(xì)胞以及野生型大鼠心肌細(xì)胞,采用LPS(100ng/ml)分別培養(yǎng)30min,1h,2h,同時(shí)采用未加入LPS刺激的細(xì)胞作為空白對(duì)照,提取蛋白用于免疫印跡檢測(cè)Akt以及MAPK信號(hào)通路的激活。 結(jié)果: 1.H9c2細(xì)胞熱休克處理后恢復(fù)不同時(shí)間點(diǎn),Hsp90表達(dá)未見(jiàn)顯著性變化。Hsp25,Hsp27以及αBC均于恢復(fù)1h起表達(dá)開(kāi)始上調(diào)(P＜0.05),12h達(dá)高峰,其后略有下降。 2.αBc對(duì)大鼠心肌細(xì)胞LPS誘導(dǎo)NF-κB激活具有保護(hù)作用 (1)αBC高表達(dá)減少LPS誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞IκB的激活。LPS處理后30min起IκB即降解(P＜0.05),至1h進(jìn)一步降解,且αBC及對(duì)照組間有顯著性差異(P＜0.05),隨后恢復(fù),至2h兩者均基本恢復(fù)至正常水平。(2)大鼠心肌細(xì)胞中αBC抑制了LPS誘導(dǎo)的NF-κB激活。NF-κB報(bào)告基因檢測(cè)顯示,LPS處理后2h NF-κB已被激活(P＜0.05),且αBC組顯著低于PCI組(P＜0.05)。 3.(2)αBC高表達(dá)減少LPS誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞MAPK通路的激活。LPS處理30min起,H9c2細(xì)胞JNKs,ERKs,P38即被激活,至2hαBC組JNKs,ERKs,P38磷酸化激活程度均顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。(3)αBC高表達(dá)增強(qiáng)LPS誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞Akt通路的激活。LPS處理30min后,H9c2細(xì)胞Akt磷酸化水平增加(P＜0.05),但與對(duì)照組相比較,30min和2h時(shí)間點(diǎn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染αBC組的Akt磷酸化水平進(jìn)一步增強(qiáng)(P＜0.05)。 結(jié)論:αBC對(duì)LPS誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)具有保護(hù)作用,對(duì)其機(jī)制初步探討可能與αBC下調(diào)了NFκB、MAPK信號(hào)通路的激活以及上調(diào)了Akt的激活有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to establish a rat model of myocardial inflammatory injury induced by LPS, to observe the protective effect of 偽 BC on the inflammatory response of rat cardiomyocytes induced by LPS, and to elucidate its possible mechanism. Methods: 1. Rat myocardial H9c2 cells were subjected to heat shock at 42.5 鈩，

本文編號(hào)：2319486