【摘要】： 目的:建立兔動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型,經(jīng)兔耳緣靜脈行自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療,觀察自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞能否歸巢至腹主動(dòng)脈及其在腹主動(dòng)脈中的分布,評(píng)價(jià)降脂療效,初步探討移植細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化修復(fù)中的作用及其可能的機(jī)制,并進(jìn)行兩種細(xì)胞對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化修復(fù)的療效比較。 方法:①細(xì)胞分離純化:分別用氯化銨破碎紅細(xì)胞法和貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)兔骨髓單個(gè)核細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。②骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性鑒定:倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)及形態(tài),免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定細(xì)胞表面標(biāo)記物CD34、CD105、CD106的表達(dá)。③BrdU標(biāo)記移植細(xì)胞:BrdU標(biāo)記移植骨髓單個(gè)核細(xì)胞及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察標(biāo)記率。④兔體內(nèi)實(shí)驗(yàn):高脂飲食喂養(yǎng)法制作動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型,造模后第10周經(jīng)耳緣靜脈行自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞及間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療,分別在造模前、造模第5周、造模第10周及干細(xì)胞移植后第3、7、14、21、28天行血脂檢測(cè)、腹主動(dòng)脈病理學(xué)分析及BrdU免疫組化分析。 結(jié)果:①骨髓干細(xì)胞生物學(xué)鑒定:新鮮接種的BMMNCs為圓形,大小均一,4小時(shí)開始貼壁,接種24小時(shí)后即有少量圓形細(xì)胞貼壁,接種72小時(shí)貼壁細(xì)胞明顯增多,部分已伸出偽足變?yōu)樗笮?第7天左右細(xì)胞呈現(xiàn)克隆性生長(zhǎng),呈MSCs特征性的旋渦狀生長(zhǎng),細(xì)胞形態(tài)多呈梭形,并含少量圓形細(xì)胞。P1-P3代細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯增快,細(xì)胞體積明顯增大,多表現(xiàn)為長(zhǎng)梭形、多角形,細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)方向漸趨于一致。實(shí)驗(yàn)所采用的P3代細(xì)胞CD34染色均呈陰性反應(yīng),而CD105、CD106染色陽(yáng)性細(xì)胞在＞98%以上。②移植細(xì)胞的標(biāo)記:以20μmol/L的BrdU孵育骨髓單個(gè)核細(xì)胞72h及以30μmol/L的BrdU孵育骨髓MSCs72h的陽(yáng)性標(biāo)記率均達(dá)95%以上,而標(biāo)記組細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)和增殖與對(duì)照組未見明顯差異。③血脂檢測(cè):造模前各組甘油三脂(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平值沒有顯著性差異,造模第5周造模組各組TG、TC、LDL-C值達(dá)最高水平,HDL-C達(dá)最低水平.造模第10周造模組各組TG、TC、LDL-C、HDL-C與第5周無(wú)明顯差異.干細(xì)胞移植后第7天移植組血脂水平低于對(duì)照組,三組間兩兩比較差異有顯著性(P＜0.05);至第21天對(duì)照組TG、TC、HDL-C、LDL-C分別為(4.65±0.95)mmol/L、(16.09±1.89)mmol/L、(1.55±0.50)mmol/L、(9.37±1.26)mmol/L,骨髓MSCs移植組TG、TC、HDL-C、LDL-C分別為(2.88±0.49)mmol/L、(13.70±3.52)mmol/L、(2.35±0.50)mmol/L、(3.11±1.16)mmol/L,BMMNCs移植組TG、TC、HDL-C、LDL-C分別為(1.11±0.20)mmol/L、(1.37±0.38)mmol/L、(5.34±0.75)mmol/L、(0.61±0.33)mmol/L,三組間兩兩比較差異極顯著(P＜0.01)。④腹主動(dòng)脈病理學(xué)觀察:高脂飼料喂養(yǎng)第10周各模型組肉眼可見大量灰黃色斑點(diǎn)及條紋狀脂質(zhì),向內(nèi)膜表面顯著隆起。光鏡下,內(nèi)膜顯著增厚、水腫、內(nèi)膜下有大量泡沫細(xì)胞、少許炎癥細(xì)胞,未見膽固醇結(jié)晶。兩移植組分別移植MSCs和BMMNCs后28天,動(dòng)脈粥樣斑塊減輕,顯逆轉(zhuǎn)趨勢(shì),明顯好于對(duì)照組,兩移植組之間無(wú)明顯差異。⑤腹主動(dòng)脈組織BrdU免疫組織化學(xué)分析:骨髓MSCs移植組和BMMNCs移植組于移植后各時(shí)間點(diǎn)腹主動(dòng)脈組織BrdU染色均呈陰性。 結(jié)論:①高脂飼料喂養(yǎng)10周,成功復(fù)制兔腹主動(dòng)脈粥樣硬化和高脂血癥。②經(jīng)靜脈輸注骨髓單個(gè)核細(xì)胞移植和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植均有一定降脂、逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的作用。③擴(kuò)增培養(yǎng)后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于高脂血癥的療效優(yōu)于骨髓單個(gè)核細(xì)胞。④經(jīng)耳緣靜脈移植的骨髓干細(xì)胞未遷移并定居于腹主動(dòng)脈,未直接參與動(dòng)脈粥樣硬化血管結(jié)構(gòu)和功能的修復(fù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R-332;R543.5

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本文編號(hào)：2317203