【摘要】： 創(chuàng)傷弧菌(Vibrio vulnificus)是嚴(yán)重危害水產(chǎn)動(dòng)物的人獸致病菌。莢膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)是創(chuàng)傷弧菌重要的毒力因子和抗原成分,在創(chuàng)傷弧菌的致病過(guò)程中起重要作用,為了了解創(chuàng)傷弧菌CPS的免疫原性,本研究以鰻源創(chuàng)傷弧菌強(qiáng)毒株FJ03-X2為研究對(duì)象,提取純化了創(chuàng)傷弧菌CPS,并對(duì)其成分、分子量,毒力和免疫原性進(jìn)行了分析。 紫外吸收分光光度法測(cè)定CPS樣品,其主要峰值在200nm,基本符合多糖吸收峰的特征;SDS-PAGE的雙氨銀染圖譜未見明顯的蛋白質(zhì)和脂多糖條帶;瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示CPS樣品含少量核酸成分。結(jié)果表明提取得到較純的CPS。 通過(guò)SDS-PAGE和阿爾新藍(lán)-雙氨銀染法分析CPS,結(jié)果表明,CPS的相對(duì)分子量分布范圍為311～20 KDa;CPS可分為高分子量成分和低分子量成分;高分子量成分僅用阿爾新藍(lán)染色即可在凝膠上清晰顯示,呈現(xiàn)為連續(xù)的彌散狀區(qū)帶,其含量較高,相對(duì)分子量范圍為311～43 KDa;低分子量成分則需阿爾新藍(lán)-雙氨銀染法染色才能在凝膠上顯示,其含量較低,相對(duì)分子量范圍為43～20 KDa。 用CPS經(jīng)腹腔注射免疫昆明鼠,通過(guò)菌體凝集反應(yīng)、ELISA和Dot ELISA等方法分析CPS對(duì)鼠的免疫原性,結(jié)果顯示,鼠抗CPS血清可和一定濃度的創(chuàng)傷弧菌菌株FJ03-X2菌液發(fā)生凝集反應(yīng),凝集效價(jià)為2~(4～5);ELISA結(jié)果表明鼠抗CPS血清的抗體效價(jià)可達(dá)1∶12 800。初步說(shuō)明,鰻源創(chuàng)傷弧菌菌株FJ03-X2的CPS對(duì)小鼠具有免疫原性,能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性體液免疫應(yīng)答。 毒力試驗(yàn)表明,CPS對(duì)歐鰻無(wú)直接致病力。CPS經(jīng)腹腔注射免疫接種歐鰻,Dot ELISA結(jié)果顯示,CPS不能激發(fā)試驗(yàn)歐鰻產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答;免疫保護(hù)試驗(yàn)表明,CPS不能誘導(dǎo)試驗(yàn)歐鰻產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答。
[Abstract]:Vibrio vulnificus (Vibrio vulnificus) is a human animal pathogen that seriously endangers aquatic animals. Capsule polysaccharide (Capsular polysaccharide,CPS) is an important virulence factor and antigenic component of Vibrio vulnificus, which plays an important role in the pathogenesis of Vibrio vulnificus. In order to understand the immunogenicity of Vibrio vulnificus CPS, a virulent strain FJ03-X2 from Vibrio vulgaris was studied in this study. CPS, was extracted and purified from Vibrio vulnificus and its components, molecular weight, virulence and immunogenicity were analyzed. UV absorption spectrophotometry showed that the main peak value of CPS was 200 nm, which basically accorded with the characteristics of polysaccharide absorption peak, and no obvious protein and lipopolysaccharide bands were found in the silver staining spectrum of SDS-PAGE. Agarose gel electrophoresis showed that CPS samples contained a small amount of nucleic acids. The results showed that pure CPS. was obtained by extraction. The results of CPS, analysis by SDS-PAGE and Alxinole-bisamino-silver staining showed that the relative molecular weight distribution range of CPS was 31120 KDa;CPS, which could be divided into high molecular weight component and low molecular weight component. The high molecular weight components can be clearly displayed on the gel by Alxin blue staining, showing a continuous dispersion zone, and the content of the high molecular weight components is relatively high. The relative molecular weight of the low molecular weight components in the range of 311C 43 KDa; required Albumin blue-diamino silver staining to show a lower content on the gel, with a relative molecular weight range of 43 ~ 20 KDa.. Kunming mice were immunized by intraperitoneal injection of CPS. The immunogenicity of CPS to mice was analyzed by cell agglutination reaction, ELISA and Dot ELISA. The results showed that the anti-CPS serum of mice could agglutinate with FJ03-X2 of a certain concentration of Vibrio vulnificus strain. The agglutination titer was 2 ~ (4); ELISA. The results showed that the antibody titer of mouse anti CPS serum could reach 1:12 800. The preliminary results showed that the CPS of Vibrio vulnificus strain FJ03-X2 had immunogenicity to mice and could induce specific humoral immune response in mice. The virulence test showed that CPS had no direct pathogenicity to eel. CPS was inoculated intraperitoneally with eel, Dot ELISA. The results showed that CPS could not stimulate humoral immune response of eel. Immune protection test showed that CPS could not induce protective immune response in eel.
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 路楊;馮潔惠;;1例下肢創(chuàng)傷弧菌所致膿毒血癥的護(hù)理[J];護(hù)理實(shí)踐與研究;2011年16期

2 朱海明;嚴(yán)紀(jì)文;宋曼丹;楊冰;賴蔚傮;王建;王海燕;;廣東省部分海產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌的污染監(jiān)測(cè)[J];華南預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年04期

3 韓善橋;虞積耀;姜濤;王大鵬;;創(chuàng)傷合并海水浸泡動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)研究[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年08期

4 柯春林;喬德亮;曾曉雄;;獸疫鏈球菌莢膜多糖對(duì)免疫抑制鼠的抗氧化和免疫調(diào)節(jié)活性研究[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2011年08期

5 林杰;吳露楠;;以下肢腫痛為首發(fā)表現(xiàn)的創(chuàng)傷弧菌感染2例[J];中國(guó)社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè));2011年22期

6 呂素芳;郭廣君;唐娜;魏鳳;沈志強(qiáng);;豬胸膜肺炎放線桿菌分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2011年06期

7 李紅;李茂光;唐靜;梁麗;李亞南;何莉;葉強(qiáng);;b型流感嗜血桿菌總抗體ELISA定量檢測(cè)方法的建立[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2011年08期

8 李平;溫海;;隱球菌病的診治進(jìn)展[J];中國(guó)真菌學(xué)雜志;2011年03期

9 蘆丹;張海玲;金文軍;孫偉;劉小兵;聞艷紅;;2008-2010年北京市昌平區(qū)食品中食源性致病菌污染狀況分析[J];中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2011年08期

10 宮春飛;許會(huì)彬;;全程C反應(yīng)蛋白的檢測(cè)與臨床應(yīng)用[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年14期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉倩倩;申洪;;創(chuàng)傷弧菌金屬蛋白酶的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

2 金永杰;孫倩;趙秋敏;李軍強(qiáng);李亞冰;孟夏萌;李小強(qiáng);;肺炎鏈球菌莢膜多糖生產(chǎn)工藝的建立[A];2010年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國(guó)藥師周論文集[C];2010年

3 榮家康;王曉;鄭小秋;朱為;;用乙醇沉淀法制備腦膜炎球菌莢膜多糖[A];第五次全國(guó)免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

4 孫敏;雷質(zhì)文;賈俊濤;劉云國(guó);高宏偉;;創(chuàng)傷弧菌LAMP檢測(cè)方法的建立6[A];動(dòng)物檢疫學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2010年

5 盧中秋;李忠旺;邱俏檬;孫琦;洪廣亮;李萌芳;梁歡;湯魯明;;創(chuàng)傷弧菌膿毒癥大鼠肺組織高遷移蛋白B1表達(dá)及血必凈干預(yù)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)第十三次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)大會(huì)論文集[C];2010年

6 吳莉莉;何菁菁;盧中秋;;創(chuàng)傷弧菌膿毒血癥患者的搶救與護(hù)理[A];全國(guó)重癥監(jiān)護(hù)護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2004年

7 盧中秋;洪廣亮;李萌芳;梁歡;邱俏檬;周鐵麗;劉剛;;創(chuàng)傷弧菌膿毒癥的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆全國(guó)創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會(huì)議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

8 陳曉東;周麗萍;周鐵麗;;創(chuàng)傷弧菌[A];2004年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

9 盧中秋;邱俏檬;程俊彥;李景榮;吳斌;;創(chuàng)傷弧菌膿毒癥診療方案[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)急救醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)第三次學(xué)術(shù)年會(huì)暨省級(jí)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

10 盧中秋;邱俏檬;程俊彥;李景榮;吳斌;;創(chuàng)傷弧菌膿毒癥診療方案(草案)[A];2007年浙江省急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 印高樂(lè);臺(tái)灣完成創(chuàng)傷弧菌基因組測(cè)序[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

2 浙江省溫州市中醫(yī)院腎內(nèi)科 董飛俠;警惕“食人菌”[N];健康報(bào);2007年

3 胡長(zhǎng)方;吃生蝦小心染食肉菌[N];福建科技報(bào);2007年

4 麥文偉;湛江局兩項(xiàng)地方標(biāo)準(zhǔn)國(guó)內(nèi)領(lǐng)先[N];中國(guó)國(guó)門時(shí)報(bào);2007年

5 北京兒童醫(yī)院微生物免疫室 姚開虎;接種哪種肺炎鏈球菌疫苗好[N];健康報(bào);2007年

6 王水湘;新一代腦膜炎球菌結(jié)合疫苗[N];家庭醫(yī)生報(bào);2007年

7 姚文;接種哪種肺炎疫苗好[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

8 主任醫(yī)師 王有國(guó);解剖腦膜炎W135[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 康存棟;突破我國(guó)水產(chǎn)疫苗研發(fā)和生產(chǎn)瓶頸[N];中國(guó)漁業(yè)報(bào);2008年

10 楊威;石斑魚病害的防治[N];中國(guó)海洋報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 柯春林;獸疫鏈球菌莢膜多糖的制備、鑒定及生物活性的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

2 楊正濤;奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌5型莢膜多糖模擬肽的研究[D];吉林大學(xué);2010年

3 劉東波;生孢噬纖維菌的分離、鑒定及生物學(xué)特性的研究[D];東北師范大學(xué);2004年

4 孟江萍;應(yīng)用啟動(dòng)子誘捕策略篩選并初步鑒定肺炎鏈球菌宿主體內(nèi)誘導(dǎo)基因[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

5 鄭晶;創(chuàng)傷弧菌溶細(xì)胞毒素及金屬蛋白酶的基因克隆、蛋白表達(dá)、抗體制備及其致病性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

6 劉翠華;人粘膜病原微生物的分子致病機(jī)理及分子診斷學(xué)研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 張燕;肺炎克雷伯氏菌莢膜免疫活性物質(zhì)的研究[D];天津科技大學(xué);2005年

8 薛挺;大腸桿菌及金黃色葡萄球菌AI-2群體感應(yīng)系統(tǒng)的調(diào)控研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2009年

9 趙巖;Ⅳ型分泌系統(tǒng)在高致病性2型豬鏈球菌引發(fā)鏈球菌中毒性休克綜合征中作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 趙金方;病原菌細(xì)胞毒素及感染相關(guān)高水平Ca~(2+)誘導(dǎo)宿主細(xì)胞凋亡的作用與機(jī)制[D];浙江大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉新華;創(chuàng)傷弧菌FJ03-X2莢膜多糖的提取和免疫原性分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2008年

2 楊盛永;金黃色葡萄球菌液體發(fā)酵制備莢膜多糖[D];大連理工大學(xué);2012年

3 李永濤;創(chuàng)傷弧菌溶細(xì)胞素基因vvhA的克隆和表達(dá)[D];浙江大學(xué);2004年

4 張文佳;B型流感嗜血桿菌的莢膜多糖抗體水平及基因分型研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

5 楊育芳;B群鏈球菌多糖-蛋白質(zhì)結(jié)合疫苗的研究和制備[D];西北大學(xué);2004年

6 李艷;創(chuàng)傷弧菌對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

7 郭宇;奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌莢膜多糖主要血清型的鑒定及cap8J基因的克隆表達(dá)[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 周丹;益生性乳桿菌細(xì)胞表面特性研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

9 何閃閃;水產(chǎn)貝類中副溶血弧菌與創(chuàng)傷弧菌的基因檢測(cè)與分析[D];中國(guó)海洋大學(xué);2004年

10 嚴(yán)智敏;創(chuàng)傷弧菌膠體金免疫層析試紙條研制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：2289507