【摘要】：目的克隆并表達白紋伊蚊唾液腺Aalb_34ku-2蛋白。方法根據(jù)白紋伊蚊(羅馬株)34ku-2開放讀碼框序列(Aalb_34ku-2)(GenBank:AY826118.1)設計特異引物,采用RT-PCR技術從白紋伊蚊廣州株雌蚊體內擴增獲得Aalb_34ku-2基因。利用瑞士生物信息學研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)中有關基因和蛋白序列的分析工具,結合其他生物信息學分析軟件包,分析預測該蛋白質的結構功能;將該基因克隆到原核表達質粒pET28a(+)中,重組質粒在大腸埃希菌BL21/DE3中經(jīng)異丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導表達,表達產物用SDS-PAGE電泳鑒定。結果 RT-PCR擴增獲得Aalb_34ku-2 2個轉錄本。Aalb_34ku-2_1序列長度為954bp,編碼318個氨基酸,等電點為5.84;Aalb_34ku-2_2的ORF為882bp,編碼294個氨基酸,等電點為6.09。兩者相差24個氨基酸;構建Pet28a(+)-Aalb_34ku-2_1重組表達載體并轉入大腸埃希菌E.coli BL21(DE3),IPTG誘導后得到的重組蛋白與目的蛋白分子質量(34ku)相符,經(jīng)鑒定為包涵體蛋白。結論成功構建pET28a(+)-Aalb_34ku-2_1重組原核表達質粒并表達出融合蛋白,為進一步研究該蛋白的功能奠定了基礎。
[Abstract]:Objective to clone and express Aalb_34ku-2 protein in salivary gland of Aedes albopictus. Methods according to the 34ku-2 open reading frame (Aalb_34ku-2) sequence (GenBank:AY826118.1) of Aedes albopictus (Rome strain), a specific primer was designed and the Aalb_34ku-2 gene was obtained from female mosquitoes of Guangzhou Aedes albopictus strain by RT-PCR technique. Using the tools of protein analysis expert system of Swiss Institute of Bioinformatics, combining with other bioinformatics analysis software packages, the structure and function of the protein were analyzed and predicted. The gene was cloned into prokaryotic expression plasmid pET28a (). The recombinant plasmid was induced by isoprothio- 尾 -D galactoside (IPTG) in Escherichia coli BL21/DE3. The expression product was identified by SDS-PAGE electrophoresis. Results two transcripts of Aalb_34ku-2 were obtained by RT-PCR amplification. The length of Aalb_34ku-2_1 sequence was 954 BP, encoding 318 amino acids, isoelectric point was 5.84 Aalbu-2-2 ORF was 882bp, encoding 294 amino acids, isoelectric point was 6.09. The recombinant expression vector of Pet28a ()-Aalb_34ku-2_1 was constructed and transformed into Escherichia coli E.coli BL21 (DE3), IPTG). The recombinant protein was identified as inclusion body protein and was consistent with the target protein molecular weight (34ku). Conclusion the recombinant prokaryotic expression plasmid of pET28a ()-Aalb_34ku-2_1 was successfully constructed and the fusion protein was expressed, which laid a foundation for further study of the function of the fusion protein.
【作者單位】： 貴陽醫(yī)學院基礎醫(yī)學院人體寄生蟲學教研室;貴陽醫(yī)學院現(xiàn)代病原生物學實驗室;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.30600515,81060138) 貴州省省長基金項目(黔省專合字(2007)48號)
【分類號】：R384.1

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本文編號：2286914