【摘要】： 蛋白酶體是蛋白質(zhì)降解途徑中的一種重要成分。蛋白酶體降解途徑對于許多細胞進程,包括細胞周期、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細胞信號傳導(dǎo)、細胞凋亡及免疫反應(yīng)等都是必不可少的。其功能改變將引起蛋白代謝異常,導(dǎo)致細胞功能紊亂。REG是一種蛋白酶體激活因子,它能特異性結(jié)合并活化20S蛋白酶體,以ATP和泛素非依賴途徑降解目的蛋白。目前發(fā)現(xiàn)此家族有三個成員：即REGa.REGβ和REGγ。REGγ是由7個28KD的亞基形成的同源七聚體,能激活蛋白酶體的活性。 癌癥是目前人類的頭號殺手,而大腸癌、肺癌及甲狀腺癌是目前癌癥死因的幾種重要類型。癌癥的發(fā)病機理很復(fù)雜,但究其原因主要在于細胞周期失控和細胞惡性增長。之前研究顯示：p53是細胞內(nèi)重要的抑癌基因,它也是細胞增殖、分化和凋亡的一個樞紐,p53突變或者降解都會導(dǎo)致其功能失調(diào),使細胞及其后代的基因組受到嚴(yán)重?fù)p害,引發(fā)惡性腫瘤。p21是p53下游的靶基因,它和p53共同構(gòu)成細胞周期G1期的檢查站,DNA損傷后不經(jīng)過修復(fù)則無法通過,減少受損DNA的復(fù)制和積累,從而發(fā)揮抑癌作用。p21是細胞周期抑制蛋白,可導(dǎo)致細胞生長停滯,促進細胞凋亡。而本實驗室目前研究發(fā)現(xiàn)：REGγ能促進MDM2介導(dǎo)的P53降解,而且REGγ能介導(dǎo)蛋白酶體對p21的降解。由此表明,REGγ與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。但是至今為止,REGγ在癌癥發(fā)生發(fā)展中的具體機制還不是非常清楚。因此,本文我們采用9種小鼠組織、兩種人正常組織和三種典型的人類癌癥組織作為研究對象,來探討REGγ在各種正常組織和癌癥組織中的表達和分布情況,并且探究其作用機理。本文的研究能夠為以后癌癥的治療提供理論依據(jù)。 本文主要采用免疫組織化學(xué)的方法,對REGγ在9種小鼠組織的表達分布進行系統(tǒng)研究,同時通過比較REGγ在大腸癌、肺癌及甲狀腺癌中和正常人組織中的表達差異,揭示REGγ在大腸癌、肺癌及甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。最后,本文還用免疫組化的方法檢測了REGγ+/+和REGγ-/-小鼠組織中p53、p21和MDM2的分布,并和REGγ的表達做相關(guān)性分析,初步探索REGγ的作用機理。另外,我們還采用熒光素酶方法,通過體外實驗探討了REGγ可能的作用機制。 結(jié)果發(fā)現(xiàn),在正常的生理分布方面,REGγ在小鼠的神經(jīng)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)中均呈現(xiàn)陽性表達。其中神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)陽性表達率最高。特別是小腦的浦肯野細胞和視網(wǎng)膜的神經(jīng)節(jié)細胞中發(fā)現(xiàn)有特異表達。這提示REGγ可能參與細胞的生長及細胞周期的調(diào)控。同時,相對于正常癌旁組織,REGγ在大腸癌,肺癌和甲狀腺癌組織中呈現(xiàn)明顯的高表達。所以REGγ可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。在進一步的機理探究中,我們通過比較REGγ+/+和REGγ-/-小鼠中p53、p21、MDM2的表達差異,發(fā)現(xiàn)REGγ能夠減少各種小鼠組織中細胞周期調(diào)節(jié)蛋白p53和p21的表達,促進MDM2蛋白的表達。因此我們推測：REGγ對癌癥的作用可能是通過降解p53或p21的降解來實現(xiàn),其具體機制還需要進一步的探索。抑制人類癌細胞的內(nèi)源性REGγ蛋白就能夠減少MDM2介導(dǎo)的p53降解,從而促進腫瘤細胞凋亡,因此REGγ有望于成為癌癥治療的一個新的靶蛋白。
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【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R341;R73-3

【參考文獻】

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本文編號：2282262