【摘要】： 結(jié)核病是傳染病中繼艾滋病之后的第二大殺手,目前成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題�？ń槊�(BCG)作為目前世界上許多國家唯一批準(zhǔn)應(yīng)用于人體的抗結(jié)核疫苗已經(jīng)用了80多年了,然而在不同地區(qū)的人群中,BCG對青少年和成人的保護(hù)效果有明顯的差異,BCG對成人結(jié)核病效果甚微。因此,探索新的疫苗免疫策略是控制結(jié)核病的重要手段。目前,亞單位蛋白疫苗是最有發(fā)展前景的新型疫苗之一,在小鼠等動物模型中,用這類疫苗強(qiáng)化免疫BCG初免可以誘導(dǎo)出較好的免疫保護(hù)效應(yīng)。 經(jīng)研究證實(shí),融合蛋白Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4 (AMM)和佐劑二甲基三十六烷基銨(DDA)、卡介苗多糖核酸(BCG PSN)構(gòu)建的亞單位疫苗較為理想,強(qiáng)化BCG初始免疫能夠誘導(dǎo)出強(qiáng)的免疫保護(hù)效應(yīng)。然而,強(qiáng)化免疫策略的免疫程序還有待研究。 目的：本研究用AMM、DDA、BCG PSN構(gòu)建的亞單位疫苗強(qiáng)化BCG初始免疫,對免疫接種次數(shù)及時間不同對小鼠模型免疫效應(yīng)和保護(hù)效應(yīng)的影響進(jìn)行比較研究,以便獲得一個具有最佳免疫保護(hù)效應(yīng)的免疫接種程序。 方法：1.BCG初免,AMM亞單位疫苗10周后強(qiáng)化免疫一次或8、10周強(qiáng)化免疫兩次的免疫效應(yīng)比較。將AMM、DDA和BCG PSN混合構(gòu)建AMM亞單位疫苗。實(shí)驗(yàn)組1：BCG初免后第10周用AMM亞單位疫苗加強(qiáng)免疫小鼠一次；實(shí)驗(yàn)組2：BCG初免后于第8、10周分別用AMM亞單位疫苗加強(qiáng)免疫。設(shè)立生理鹽水和僅BCG免疫兩個對照組。BCG初免后第14、22周,用ELISPOT、ELISA技術(shù)檢測小鼠的細(xì)胞及體液免疫反應(yīng),第22周用BCG活菌模擬攻擊被免疫小鼠,26周用流式細(xì)胞術(shù)和ELISA技術(shù)檢測T細(xì)胞分型及體液免疫反應(yīng)。2.BCG初免,AMM亞單位疫苗10周后強(qiáng)化免疫一次、8、10周強(qiáng)化免疫兩次和6、8、10周強(qiáng)化免疫三次的免疫效應(yīng)和保護(hù)效應(yīng)比較。實(shí)驗(yàn)組1、2免疫程序同上述,另增加實(shí)驗(yàn)組3：BCG初免后于第6、8、10周分別用AMM亞單位疫苗加強(qiáng)免疫。設(shè)立PBS及僅BCG免疫兩個對照組。BCG初免后第14周應(yīng)用ELISPOT、ELISA技術(shù)檢測免疫小鼠的細(xì)胞及體液免疫反應(yīng)。第22周用H37Rv毒株攻擊被免疫小鼠,間隔6周后檢測小鼠體內(nèi)結(jié)核菌載量,分析組織病理切片。 結(jié)果：1.AMM亞單位疫苗8、10周加強(qiáng)免疫兩次誘導(dǎo)分泌IFN-γ的能力強(qiáng)于10周時加強(qiáng)免疫一次；加強(qiáng)免疫兩次組的IgG1抗體滴度明顯高于加強(qiáng)免疫一次組,而作為反映Thl型免疫反應(yīng)指標(biāo)的IgG2a/IgG1比值,強(qiáng)化免疫兩次組低于強(qiáng)化一次組；BCG模擬攻擊被免疫小鼠后,加強(qiáng)免疫一次或兩次組的CD4+CD25+T細(xì)胞含量均高于僅BCG免疫組。2.AMM亞單位疫苗8、10周加強(qiáng)免疫兩次誘導(dǎo)分泌IFN-γ的能力強(qiáng)于加強(qiáng)免疫一次和三次；IgG1抗體滴度與加強(qiáng)次數(shù)成正比,IgG2a抗體水平與加強(qiáng)次數(shù)關(guān)系不大,強(qiáng)化的次數(shù)越多,反映Th1型免疫反應(yīng)的IgG2a/IgG1比值越��；加強(qiáng)免疫兩次比一次和三次對抗結(jié)核菌的能力強(qiáng),細(xì)菌載量最少；組織切片觀察得出AMM亞單位疫苗加強(qiáng)BCG沒有加重小鼠臟器的病理損傷。 結(jié)論：BCG初免,8、10周時用AMM亞單位疫苗加強(qiáng)免疫兩次能夠引起較強(qiáng)的細(xì)胞及體液免疫反應(yīng),可以誘導(dǎo)出較強(qiáng)的保護(hù)效應(yīng)。6、8、10周加強(qiáng)三次的免疫保護(hù)效果沒有超越加強(qiáng)兩次。加強(qiáng)的次數(shù)增多會引起Th2型免疫反應(yīng)加強(qiáng)。AMM亞單位疫苗加強(qiáng)BCG的免疫策略沒有加重小鼠的病理損傷。
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【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 黃國明;牛瑟氏泰勒蟲p23、p33重組蛋白亞單位疫苗聯(lián)合免疫效果評價(jià)[D];延邊大學(xué);2013年

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本文編號：2281980