發(fā)布時(shí)間：2018-10-10 10:05

【摘要】： 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?雙歧桿菌是人和動(dòng)物腸道內(nèi)重要的生理菌,其表面分子脂磷壁酸(Lipoteichoic acid ,LTA)已被證實(shí)具有抗氧化的作用,能夠有效延緩衰老,但其機(jī)制并不是很清楚。本研究用H2O2誘導(dǎo)人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞WI-38出現(xiàn)“應(yīng)激誘導(dǎo)早熟性老化”(stress-induced premature senescence,SIPS),觀察雙歧桿菌LTA是否具有對(duì)抗H2O2誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的作用,以及WI-38細(xì)胞中p21、CDK2和cyclin E mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化,初步探討雙歧桿菌LTA抗細(xì)胞衰老的細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法 1.采用噻唑蘭比色(MTT)法檢測(cè)經(jīng)雙歧桿菌LTA處理前后,人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞WI-38生存率影響的變化;用亞致死量的H2O2誘導(dǎo)細(xì)胞衰老,β-半乳糖苷酶細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)衰老細(xì)胞,計(jì)算其陽(yáng)性百分率并檢測(cè)經(jīng)雙歧桿菌LTA處理前后對(duì)β-半乳糖苷酶細(xì)胞化學(xué)染色陽(yáng)性百分率的變化。 2.雙歧桿菌LTA體外作用人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞WI-38后,用RT-PCR檢測(cè)衰老相關(guān)指標(biāo)p21、cyclin E和CDK2的mRNA水平變化,Western blot分析p21、cyclin E和CDK2蛋白水平的變化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1.經(jīng)雙歧桿菌LTA作用后,人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞WI-38的生存率增高并且β-半乳糖苷酶細(xì)胞化學(xué)染色陽(yáng)性率降低。 2.經(jīng)雙歧桿菌LTA作用后,WI-38細(xì)胞中與衰老相關(guān)的p21的mRNA及蛋白表達(dá)水平下降;cyclin E和CDK2的mRNA及蛋白表達(dá)水平升高。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論 1.雙歧桿菌LTA能抑制H2O2對(duì)WI-38細(xì)胞氧化損傷作用,抑制H2O2對(duì)WI-38細(xì)胞誘導(dǎo)衰老的作用。 2.雙歧桿菌LTA能明顯下調(diào)WI-38細(xì)胞中p21的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá);上調(diào)WI-38細(xì)胞中cyclin E和CDK2的mRNA及蛋白表達(dá)水平。
[Abstract]:Objective Bifidobacterium is an important physiological bacterium in human and animal intestinal tract. Its surface molecule (Lipoteichoic acid has been proved to have antioxidant effect and can effectively delay senescence, but its mechanism is not very clear. In this study, H2O2 was used to induce human embryonic lung diploid fibroblasts (WI-38) to appear "stress-induced premature aging" (stress-induced premature senescence,SIPS). Whether the bifidobacterium LTA could antagonize the senescence induced by H2O2 was observed. The changes of expression of p21 CDK2, cyclin E mRNA and protein in WI-38 cells were also studied to explore the cell cycle regulation mechanism of bifidobacterium LTA against cell senescence. Experimental method 1. The changes of WI-38 survival rate of human embryonic lung diploid fibroblasts treated with bifidobacterium LTA were detected by thiazolam colorimetric (MTT) assay, the senescence of cells was induced by sublethal H2O2, and the aging cells were detected by 尾 -galactosidase cytochemical staining. The positive percentage of 尾 -galactosidase was calculated and the changes of 尾 -galactosidase cytochemical staining were detected before and after treatment with Bifidobacterium LTA. 2. Bifidobacterium LTA was used to detect the mRNA levels of p21 cyclin E and CDK2 in human embryonic lung diploid fibroblasts treated with WI-38 in vitro. Western blot was used to analyze the changes of p21 cyclin E and CDK2 protein levels. Experimental results 1. After treated with Bifidobacterium LTA, the survival rate of human embryonic lung diploid fibroblasts increased and the positive rate of 尾 -galactosidase cytochemical staining decreased. 2. The expression level of mRNA and protein of senescence related p21 in WI-38 cells was decreased after treatment with bifidobacterium LTA. The expression of mRNA and protein of cyclin E and CDK2 was increased. Conclusion 1. Bifidobacterium LTA inhibited the oxidative damage of H2O2 to WI-38 cells and the senescence of WI-38 cells induced by H2O2. 2. Bifidobacterium LTA could significantly down-regulate the expression of p21 mRNA and protein in WI-38 cells, and up-regulate the mRNA and protein expression of cyclin E and CDK2 in WI-38 cells.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R371

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