【摘要】： 血吸蟲病是世界上嚴重危害人類健康的寄生蟲病之一,流行于世界上76個國家和地區(qū),目前有2億感染者。流行于我國的日本血吸蟲病是所有血吸蟲病中防治難度最大的一種。利用吡喹酮治療在控制該病的過程中起到重要作用,但治療后的反復感染,及反復化療可能產(chǎn)生抗藥性問題,使得僅靠單一藥物治療無法從根本上控制血吸蟲病的傳播。研發(fā)安全有效的抗血吸蟲疫苗,單獨使用或結合化療將極大地推動血吸蟲病的防治工作。但早期研制的疫苗,從安全性或保護效果來看并不令人滿意。因此,新型抗原的鑒定和新型疫苗的研制是一項十分緊迫的任務。 本研究通過生物信息學方法,從日本血吸蟲的8個關鍵抗原中篩查18個表位,其中5個在日本血吸蟲中鑒定,其余13個為曼氏血吸蟲中鑒定的表位在日本血吸蟲中的同源序列。利用表位改組技術成功構建5個不同長度的隨機串聯(lián)多表位人工抗原文庫,并證明文庫具有良好的表位串聯(lián)多態(tài)性。 不同文庫免疫小鼠后抗體水平的檢測,表明多表位基因的長度對文庫的抗原性具有顯著的影響。保護性實驗結果顯示5個文庫的保護效果并不理想,可能與所選的多數(shù)表位并未在日本血吸蟲中得到有效證實有關。文庫L2取得部分的抗生殖作用,表明只有合適長度的多表位基因文庫才有可能誘導較好的免疫保護作用。 通過上述工作,證實新型表位改組技術能應用于不同病原體多表位文庫的構建,確定可能誘導保護性免疫反應的多表位基因長度;同時提示要構建具有高保護性的日本血吸蟲多表位人工抗原文庫,仍有待于保護性表位的鑒定。 曼氏血吸蟲表膜四次跨膜蛋白家族成員被認為是具有保護潛力的抗原分子,其中是曼氏血吸蟲新型抗原TSP-2更是獲得高達～60%的保護力,本研究對Sm-TSP-2在日本血吸蟲中的同源分子展開鑒定和評估。研究證實日本血吸蟲Sj-TSP-2分子存在廣泛變異,根據(jù)C、D變異區(qū)不同,可分為七個亞類,同時存在不同亞類之間重組的雜合分子;三級結果預測顯示主要變異區(qū)暴露于分子的表面,表明此分子受正選擇作用,并提示其配體的多樣性;單一成蟲RT-PCR顯示Sj-tsp-2亞類表達譜在個體成蟲中存在極大的差異,以上研究結果提示Sj-stp-2可能參與日本血吸蟲的免疫逃避。 半定量RT-PCR表明Sj-tsp-2基因在日本血吸蟲尾蚴、童蟲、雌雄成蟲和蟲卵中都有不同水平的轉錄;但Western blot分析顯示Sj-TSP-2蛋白并不在蟲卵期表達。免疫熒光定位實驗表明Sj-TSP-2定位于肺期童蟲的表膜,但在天然狀態(tài)下并不暴露;而活體成蟲及冰凍切片免疫熒光實驗則證實Sj-TSP-2分子暴露于雌雄成蟲的體表。 免疫保護實驗顯示單一Sj-TSP-2亞類重組蛋白不能獲得任何的保護效果,所有亞類重組蛋白的混合物也只獲得較低的保護力,再次提示Sj-TSP-2分子與免疫逃避相關,變異如此廣泛的Sj-TSP-2并不適合成為日本血吸蟲的候選抗原。 以上工作顯示表膜蛋白TSP-2在曼氏血吸蟲和日本血吸蟲中極大的差異性,說明曼氏血吸蟲的保護性抗原,其在日本血吸蟲中的同源分子并不一定同樣具有保護性;提示在不同環(huán)境壓力下,日本血吸蟲可能采取了不同于曼氏血吸蟲的免疫逃避策略,在一定程度上佐證了前一部分的結果,進一步強調日本血吸蟲特異的保護性抗原和表位的鑒定對于日本血吸蟲疫苗的研制的重要性。
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【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392

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