【摘要】：篩選并分析間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞過程中GCN5招募促分化相關(guān)蛋白集合體的組成。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR鑒定MSCs經(jīng)5-氮雜胞苷(5-azacytidine,5-azaC)誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞;免疫共沉淀技術(shù)分離、串聯(lián)質(zhì)譜鑒定GCN5募集蛋白集合體組成,并從心肌細(xì)胞分化角度篩選、驗(yàn)證分化相關(guān)蛋白因子。MSCs經(jīng)5-azaC誘導(dǎo)分化的心肌樣細(xì)胞表達(dá)心肌特異性基因GATA4、MEF2C和心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能蛋白cTnt、MHC和Cx43;篩選、驗(yàn)證出心肌細(xì)胞分化相關(guān)GCN5招募蛋白歸類為:(1)DNA結(jié)合蛋白Sp1/KLF;(2)轉(zhuǎn)錄輔激活子PGC-1α和Rb1;(3)轉(zhuǎn)錄延伸復(fù)合體組成成分以及信號(hào)通路蛋白Akt。通過篩選獲得MSCs經(jīng)誘導(dǎo)向心肌樣細(xì)胞分化過程中心肌分化相關(guān)蛋白因子,為進(jìn)一步研究干細(xì)胞分化信號(hào)傳導(dǎo)途徑、特異性生物靶點(diǎn)干預(yù)以及提高干細(xì)胞分化效率打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:To screen and analyze the composition of GCN5 recruitment associated protein aggregates for differentiation into cardiomyocyte-like cells induced by mesenchymal stem cells (mesenchymal stem cells,MSCs). Immunofluorescence cytochemistry and real-time fluorescence quantitative PCR were used to identify the differentiation of MSCs into cardiomyocyte-like cells induced by 5-azacytidine (5-azacytidine 5-azaC), co-immunoprecipitation technique, tandem mass spectrometry (MS) to identify the composition of GCN5 recruitment protein aggregates, and screening from the perspective of cardiomyocyte differentiation. To verify the expression of cardiomyocyte specific gene GATA4,MEF2C and cardiac myocyte structure by 5-azaC induced by differentiation related protein factor. The functional protein cTnt,MHC and Cx43; were screened. GCN5 recruitment proteins associated with cardiomyocyte differentiation were classified as: (1) DNA binding protein Sp1/KLF; (2) transcriptional coactivators PGC-1 偽 and Rb1; (3) transcription extension complex components and signal pathway protein Akt. Through screening, we obtained the related protein factor of myocardial differentiation in the process of MSCs induced cardiomyocyte differentiation, which laid a foundation for further study on the signal transduction pathway of stem cell differentiation, the intervention of specific biological target and the improvement of stem cell differentiation efficiency.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院兒科研究所;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30973219)~~
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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4 孔娟娟;Islet-1在心臟發(fā)育的乙酰化調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的樞紐作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

5 林建萍;Islet-1募集組蛋白乙�；瘡�(fù)合體促干細(xì)胞特化心肌樣細(xì)胞的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

6 魯榮;Islet-l促C_3H_（10）Tl/2向心肌樣細(xì)胞特化中基因上組蛋白乙�；饔眉跋嗷リP(guān)系研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2253125