【摘要】： 目的： 兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)誘導(dǎo)分化的軟骨細(xì)胞和同種異體BMSCs共培養(yǎng)作為種子細(xì)胞復(fù)合到動(dòng)物源性骨-軟骨復(fù)合支架上所構(gòu)建的細(xì)胞-支架復(fù)合體,植入異體兔膝關(guān)節(jié)骨-軟骨復(fù)合缺損處,觀察其修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨缺損的結(jié)果,探討通過這一方法修復(fù)動(dòng)物體內(nèi)骨軟骨復(fù)合缺損的可行性并初步評(píng)價(jià)這一新方法的價(jià)值。 方法： 1.全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)4w齡兔的BMSCs; 2.BMSCs的鑒定：形態(tài)學(xué)觀察、流式細(xì)胞法觀察BMSCs的表面抗原、細(xì)胞周期和細(xì)胞活力； 3.用特定誘導(dǎo)液將BMSCs向成軟骨細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化,通過形態(tài)學(xué)觀察、甲苯胺藍(lán)染色、Ⅱ型膠原染色等進(jìn)行鑒定； 4.取誘導(dǎo)分化的軟骨細(xì)胞和BMSCs按1：2的比例共培養(yǎng),所得的共培養(yǎng)細(xì)胞作為種子細(xì)胞； 5.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)取得兔膝關(guān)節(jié)圓柱形骨-軟骨復(fù)合體,通過深低溫冷凍去抗原后再對(duì)復(fù)合體脫脂、脫鈣、真空冷凍干燥、輻照消毒等步驟制備骨-軟骨復(fù)合支架,并行掃描電鏡的觀察； 6.將共培養(yǎng)的種子細(xì)胞復(fù)合到骨-軟骨支架上制成細(xì)胞-支架復(fù)合體,并行掃描電鏡觀察； 7.將細(xì)胞-支架復(fù)合體植入異體兔膝關(guān)節(jié)骨軟骨缺損中,分別于術(shù)后第4w、8w、12w取材,通過大體觀察和組織學(xué)評(píng)分等評(píng)價(jià)缺損修復(fù)情況。 結(jié)果： 1.全骨髓貼壁法能獲得兔BMSCs并在體外分離擴(kuò)增。 2.光鏡下觀察BMSCs形態(tài)為長(zhǎng)梭形,流式細(xì)胞儀分析,BMSCs的細(xì)胞表面抗原高表達(dá)CD29、CD44,低表達(dá)CD34、CD45,細(xì)胞活力為95.27%,G0-G1細(xì)胞占96.48%。 3.經(jīng)成軟骨誘導(dǎo)后BMSCs的細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,由梭形向橢圓形及三角形分化,甲苯胺藍(lán)染色和Ⅱ型膠原染色為陽性。 4.誘導(dǎo)分化的軟骨細(xì)胞和BMSCs能較好共存并保持原有形態(tài)生長(zhǎng)。 5.掃描電鏡觀察動(dòng)物源性骨軟骨復(fù)合支架具有多孔結(jié)構(gòu),其成骨區(qū)孔隙率為88%,孔徑150-550 u m,平均300μm；成軟骨區(qū)孔隙率為92%,孔徑為25～55μm,平均40μm,并可見共培養(yǎng)細(xì)胞能在復(fù)合支架上較好的粘附生長(zhǎng)和膠原粘附。 6.經(jīng)術(shù)后4w、8w、12w取材進(jìn)行大體觀察和組織學(xué)評(píng)分,實(shí)驗(yàn)組有骨組織和軟骨組織形成,成骨區(qū)和成軟骨區(qū)界面耦合情況明顯優(yōu)于對(duì)照組和空白組。 結(jié)論： 1.全骨髓貼壁法所獲得的兔BMSCs可在體外長(zhǎng)期、穩(wěn)定培養(yǎng),擴(kuò)增,在特定誘導(dǎo)下可向軟骨細(xì)胞定向分化。 2.誘導(dǎo)分化的軟骨細(xì)胞和BMSCs能按1：2的比例共培養(yǎng)并相互促進(jìn)增殖和分化。 3.動(dòng)物源性骨軟骨復(fù)合支架具有較好的細(xì)胞相容性,是一種理想的支架材料。 4.共培養(yǎng)細(xì)胞復(fù)合到動(dòng)物源性骨軟骨復(fù)合支架材料上所構(gòu)建的細(xì)胞-支架復(fù)合體能成功修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨缺損。
[Abstract]:Aim: to co-culture chondrocytes induced by (BMSCs) from rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and allogeneic BMSCs (BMSCs) as a cell-scaffold complex constructed by composite seeding cells onto animal-derived osteochondral scaffolds. To observe the results of repairing the defects of articular cartilage and subchondral bone of rabbits with allograft bone and cartilage composite defect of knee joint. To explore the feasibility of repairing osteochondral composite defects in animals by this method and to evaluate the value of this new method. Methods: 1. BMSCs, 2.BMSCs: morphological observation, flow cytometry, BMSCs surface antigen, cell cycle and cell viability were observed by whole bone marrow adherent method. 3. BMSCs was induced to differentiate into chondroblast by specific inducer, and identified by morphological observation, toluidine blue staining and type 鈪，

本文編號(hào)：2145129