【摘要】： 目的: 比較聯(lián)合激動Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)的樹突細胞(dendritic cell.DC)和常規(guī)培養(yǎng)的樹突細胞在功能上的區(qū)別,并通過體外試驗比較兩者作為腫瘤疫苗對表達CEA腸癌的治療作用。 材料與方法: 本課題使用人CEA轉基因小鼠和轉染人CEA的MC38小鼠腸癌細胞株MC38-CEA作為動物模型。將體外培養(yǎng)的DC分為聯(lián)合激動TLR組和常規(guī)組,通過檢測DC表面重要標志物、DC分泌IL-12量及DC對淋巴細胞的促增殖作用,比較兩者在激活細胞免疫方面功能的區(qū)別。另外,在DC上荷載小鼠MHCⅠ類分子限制性表位CEA_(526-533),制備CEA特異性DC腫瘤疫苗,在體外進行細胞毒試驗,初步研究其對MC38-CEA的治療作用。 結果: 1聯(lián)合TLR組DC重要表面標志物的表達普遍高于常規(guī)組DC。 2聯(lián)合TLR組DC的IL-12分泌量顯著高于常規(guī)組DC。(P＜0.001) 3聯(lián)合TLR組DC對淋巴細胞的促增值作用顯著強于常規(guī)組DC(P＜0.05)。 4聯(lián)合TLR組DC作為DC疫苗免疫小鼠后獲得的效應細胞對MC38-CEA腸癌細胞在較高效應細胞:靶細胞(E:T)比值時具有一定的殺傷作用并顯著優(yōu)于常規(guī)組(P＜0.05)。對荷載CEA_(526-533)的MC38-CEA腸癌細胞,聯(lián)合TLR組和常規(guī)組都具有高效的特異性殺傷作用,其中在較低E:T值時聯(lián)合TLR組的殺傷作用顯著高于常規(guī)組(P＜0.05)。 結論: 1聯(lián)合TLR組DC與常規(guī)組DC相比,具有更理想的成熟度,并能更有效激活細胞免疫反應,提示聯(lián)合激動TLR可能增強DC腫瘤疫苗的抗腫瘤效應。 2使用聯(lián)合激動TLR的DC制備CEA特異性DC腫瘤疫苗,在體外試驗中對MC38-CEA小鼠腸癌細胞株具有一定殺傷作用且是CEA特異性的,而常規(guī)DC疫苗無明顯殺傷作用,但還須進行體內試驗進一步驗證治療效果。
[Abstract]:Aim: to compare the functional differences between dendritic cells (dendritic cell.DC) combined with Toll-like receptor (dendritic cell.DC) and dendritic cells (DC) cultured in vitro, and to compare their therapeutic effects on the expression of CEA in colorectal cancer as tumor vaccine in vitro. Materials and methods: human CEA transgenic mice and MC38 mouse intestinal cancer cell line MC38-CEA transfected with human CEA were used as animal models. The DC cultured in vitro was divided into two groups: the combined TLR group and the routine group. By detecting the amount of IL-12 secreted by DC and the effect of DC on the proliferation of lymphocytes, the difference of the function of DC in activating cellular immunity was compared. In addition, CEA specific DC tumor vaccine was prepared by loading mouse MHC class I restricted epitope CEA _ (526-533) on DC. The cytotoxicity test was carried out in vitro to study the therapeutic effect of CEA _ (526-533) on MC38-CEA. Results: 1 the expression of important surface markers of DC in combined TLR group was generally higher than that in DC2 combined with TLR group, and the IL-12 secretion in DC was significantly higher than that in conventional group DC. (P < 0.001) 3 combined with TLR. The effect of DC group on lymphocyte proliferation was significantly stronger than that of normal group (DC (P < 0. 05). (4) combined with TLR group DC was used to immunize mice with MC38-CEA intestinal cancer cells in higher effector cells: target cells (E: t) The ratio had a certain killing effect and was significantly better than the routine group (P < 0.05). MC38-CEA intestinal cancer cells loaded with CEA526-533 had highly specific killing effects in both the combined TLR group and the conventional group. The killing effect of the combined TLR group was significantly higher than that of the conventional group at a lower E: t value (P < 0. 05). Conclusion: (1) compared with conventional TLR group, DC in combination with TLR has more ideal maturity and more effective activation of cellular immune response. It is suggested that the combined stimulation of TLR may enhance the antitumor effect of DC tumor vaccine. 2 the DC combined with agitated TLR can be used to prepare CEA specific DC tumor vaccine. In vitro test, the MC38-CEA mouse intestinal cancer cell line has a certain killing effect and is CEA specific, but the conventional DC vaccine has no obvious killing effect, but the in vivo test must be carried out to further verify the therapeutic effect.
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【共引文獻】

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本文編號：2144065