本文選題：人低氧誘導(dǎo)因子1-α(HIF1-α) + 基因轉(zhuǎn)染��； 參考：《吉林大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 近來(lái)研究發(fā)現(xiàn),在人的外周血中存在血管內(nèi)皮祖細(xì)胞,它來(lái)源于骨髓,在組織缺血的情況下,內(nèi)皮祖細(xì)胞可以從骨髓中動(dòng)員,遷移并結(jié)合到活躍的血管再生部位,增殖、分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞,參與局部新生血管的形成這一過(guò)程稱為血管發(fā)生。目前,在成人的外周血、骨髓、胎兒臍血中都證實(shí)含有內(nèi)皮祖細(xì)胞。HIF-1是低氧條件下廣泛存在于哺乳動(dòng)物和人體內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子,可調(diào)節(jié)多種靶基因如VEGF、紅細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EPO)等的表達(dá)。本實(shí)轉(zhuǎn)染HIF基因到內(nèi)皮祖細(xì)胞驗(yàn),通過(guò)將基因與EPCs治療結(jié)合起來(lái),一方面可以提高EPCs的“利用率”,另一方面,為基因進(jìn)入體內(nèi)找到合適“載體”,達(dá)到更強(qiáng)的治療效果。 本實(shí)驗(yàn)采用密度梯度法分離人骨髓中的內(nèi)皮祖細(xì)胞,RT-PCR法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞特異性成分ecNOS,flk-1(KDR)的表達(dá);采用硝酸酶還原法測(cè)定培養(yǎng)基中NOS活性的變化,間接證實(shí)內(nèi)皮細(xì)胞的功能;用acLDL-Dil和FITC-UEA-1對(duì)細(xì)胞染色后,通過(guò)激光共聚焦顯微鏡鑒定,證實(shí)從人骨髓中成功分離出并誘導(dǎo)培養(yǎng)出內(nèi)皮祖細(xì)胞。 采用LipofectamineTm2000介導(dǎo)PCDNA3.0-HIF1α質(zhì)粒轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細(xì)胞,反向聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)HIF1α的轉(zhuǎn)錄;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)VEGF表達(dá),證實(shí)轉(zhuǎn)染HIF1α的內(nèi)皮祖細(xì)胞上清中VEGF含量比未轉(zhuǎn)染HIF1α的內(nèi)皮祖細(xì)胞上清中VEGF含量增加約5倍;免疫印跡法(Westem blot)檢測(cè)HIF1蛋白表達(dá),最終確認(rèn)PCDNA3.0-HIF1α質(zhì)粒轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細(xì)胞成功。 下一步的研究中,我們將探討轉(zhuǎn)染HIF基因的內(nèi)皮祖細(xì)胞對(duì)心肌梗塞心肌血管修復(fù)能力及血管再生能力修復(fù),進(jìn)而為修復(fù)病損心臟組織提供另一條方案,為在細(xì)胞水平促進(jìn)缺血心肌組織血管新生尋找新的途徑,為心肌梗塞細(xì)胞生物治療開創(chuàng)一條新的方法。
[Abstract]:Recent studies have found that vascular endothelial progenitor cells exist in human peripheral blood, which are derived from bone marrow. In the case of tissue ischemia, endothelial progenitor cells can mobilize from bone marrow, migrate and combine with active vascular regeneration sites to proliferate. The process of differentiation into mature endothelial cells involved in the formation of local neovascularization is called angiogenesis. At present, in adult peripheral blood, bone marrow, fetal umbilical cord blood have confirmed that the endothelial progenitor cell. HIF-1 is a transcription factor widely existed in mammals and human body under hypoxia. It can regulate the expression of many target genes such as VEGF, erythrocyte growth factor (EPO), etc. HIF gene was transfected into endothelial progenitor cells (EPCs). The combination of HIF gene and EPCs therapy can improve the "utilization ratio" of EPCs on the one hand, on the other hand, find the appropriate "vector" for gene entry into the body to achieve a stronger therapeutic effect. In this experiment, endothelial progenitor cells from human bone marrow were isolated by density gradient method to detect the expression of ecNOSflk-1 (KDR), the activity of NOS in culture medium was determined by nitrate reduction method, and the function of endothelial cells was confirmed indirectly. After staining with acLDL-Dil and FITC-UEA-1, it was confirmed by laser confocal microscopy that endothelial progenitor cells were successfully isolated from human bone marrow and induced to culture endothelial progenitor cells. PCDNA3.0-HIF1 偽 plasmid was transfected into endothelial progenitor cells by Lipofectamine Tm2000, reverse polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect HIF1 偽 transcription, and VEGF expression was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa). It was confirmed that the VEGF content in the supernatant of endothelial progenitor cells transfected with HIF1 偽 was increased by about 5 times than that in the supernatant of endothelial progenitor cells without HIF1 偽 transfection, and the expression of HIF1 protein was detected by Western blotting, and it was confirmed that PCDNA3.0-HIF1 偽 plasmid was successfully transfected into endothelial progenitor cells. In our next study, we will explore the repair of vascular repair and vascular regeneration by endothelial progenitor cells transfected with HIF gene in myocardial infarction. To find a new way to promote angiogenesis in ischemic myocardial tissue at cell level and to open up a new method for biotherapy of myocardial infarction cells.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2105552