發(fā)布時(shí)間：2018-07-06 21:00

  本文選題：Graves’病 + 促甲狀腺素受體抗體　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】：Graves' disease (GD)是一種自身免疫性疾病,其發(fā)病原因和致病機(jī)理較為復(fù)雜,至今為止國(guó)內(nèi)外都沒(méi)有得出一個(gè)明確的結(jié)論。本文的目的旨在利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物探究GD可能的發(fā)病原因及其內(nèi)在的致病機(jī)理,以期為臨床研究提供一個(gè)可用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立方法。通常在未經(jīng)治療的GD患者血清中存在著一種促甲狀腺素受體抗體(TRAb),該抗體能與甲狀腺細(xì)胞膜上的促甲狀腺素受體(TSHR)結(jié)合并促進(jìn)T3、T4的合成與分泌。獨(dú)特型-抗獨(dú)特型(id and anti-id)免疫網(wǎng)絡(luò)學(xué)說(shuō)認(rèn)為T(mén)RAb可能相當(dāng)于TSHAb1誘生的TSHAb2,因TSHAb2含有與TSH相似的結(jié)構(gòu)成為其“內(nèi)影像”,從而模擬TSH與TSHR結(jié)合促使甲狀腺激素分泌增加。為驗(yàn)證該理論,本文利用鼠抗人TSH單克隆抗體免疫家兔使其產(chǎn)生針對(duì)該抗體的多克隆抗體,也即TSHAb2c隨后通過(guò)測(cè)定免疫后試驗(yàn)動(dòng)物的T3、T4以及TRAb.甲狀腺刺激性抗體(TSAb),以觀察該二抗對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身的影響。隨后進(jìn)一步提取純化該多克隆抗體,注射健康家兔后,觀察不同時(shí)段家兔體內(nèi)T3、T4水平的變化。利用FRTL-5細(xì)胞系生長(zhǎng)對(duì)TSH的絕對(duì)依賴性,使用MTT(四唑鹽)比色試驗(yàn)法測(cè)定了提取純化后的多克隆抗體對(duì)其生長(zhǎng)的維持作用,即該多克隆抗體的類TSH樣作用。為進(jìn)一步觀察該多克隆抗體與TSHR結(jié)合后的信號(hào)傳遞途徑,測(cè)定了加入多克隆抗體后FRTL-5細(xì)胞中第二信使cAMP的產(chǎn)生情況。為驗(yàn)證該二抗是否能與TSHR結(jié)合,利用125I標(biāo)記的人TSH (125I-hTSH)測(cè)定了該多克隆抗體與TSH之間競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合TSHR的能力。結(jié)果顯示經(jīng)過(guò)多次免疫加強(qiáng)后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均能產(chǎn)生針對(duì)鼠抗人TSH單克隆抗體的多克隆抗體,伴隨抗體效價(jià)的不斷增高,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物T3、T4水平均有不同程度升高,兩者呈現(xiàn)一致趨勢(shì)。在經(jīng)過(guò)4-5次加強(qiáng)免疫后所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的TRAb和TSAb測(cè)定均呈陽(yáng)性,而且TRAb和TSAb的升高趨勢(shì)同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抗體的產(chǎn)生趨勢(shì)相一致。該多克隆抗體同125I-hTSH競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明,在一定范圍內(nèi)兩者間存在著同TSHR競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的關(guān)系。純化后的多克隆抗體靜脈注射正常家兔后可促使其T3,T4升高。MTT比色試驗(yàn)法測(cè)定的結(jié)果則顯示出該多克隆抗體具有類似于TSH樣的生物學(xué)活性,對(duì)于去除了TSH后其它組分不變的培養(yǎng)基中的FRTL-5細(xì)胞仍能維持其正常貼壁及生長(zhǎng)。cAMP的測(cè)定則顯示出同加入了hTSH的正常對(duì)照組相比,單獨(dú)加入純化后的多克隆抗體可顯著增加FRTL-5細(xì)胞內(nèi)第二信使cAMP的產(chǎn)生。綜上可以看出由免疫鼠抗人TSH單克隆抗體得到的二抗確實(shí)模擬了最初的免疫原-hTSH的作用。該抗體不僅成功引起了免疫動(dòng)物自身T3、T4水平的升高,而且還能促使正常家兔T3、T4水平的升高。進(jìn)一步的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)了該多克隆抗體具有類似于TSH樣的活性。而該抗體與TSH之間也存在著同TSHR的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型在部分特征上吻合了GD病人的臨床表現(xiàn),為進(jìn)一步研究GD的發(fā)病原因和致病機(jī)理提供了重要的幫助。
[Abstract]:In order to study the effect of TSHAb2 ( TSHAb2 ) on the growth of TSHAb2 induced by TSHAb2 ( TSHAb2 ) , it is suggested that TSHAb2 may be equivalent to TSHAb2 induced by TSHAb2 .
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R-332;R581.1

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本文編號(hào)：2104069