本文選題：人成纖維細胞生長因子 + 慢病毒質(zhì)粒　； 參考：《中國生物制品學(xué)雜志》2015年07期

【摘要】：目的構(gòu)建人成纖維細胞生長因子21(human fibroblast growth factor 21,h FGF21)重組慢病毒質(zhì)粒,并進行包裝和鑒定。方法 PCR擴增人FGF21 ORF序列,經(jīng)Eco RⅠ和Bam HⅠ雙酶切后,連接至慢病毒載體PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro,構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21,經(jīng)293T細胞包裝為重組慢病毒顆粒,并感染KMB17靶細胞。熒光顯微鏡觀察293T細胞中報告基因EGFP的綠色熒光,判斷重組慢病毒的感染效率;RT-PCR法檢測KMB17靶細胞中h FGF21基因m RNA的轉(zhuǎn)錄;免疫熒光和Western blot法檢測KMB17靶細胞中h FGF21蛋白的表達。結(jié)果重組慢病毒質(zhì)粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21經(jīng)雙酶切及測序鑒定,證明構(gòu)建正確,在包裝細胞中獲得較高的轉(zhuǎn)染效率,重組慢病毒感染KMB17靶細胞72 h后,熒光顯微鏡下可見EGFP綠色熒光。感染組KMB17靶細胞中存在h FGF21基因m RNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達。結(jié)論成功構(gòu)建了重組慢病毒質(zhì)粒PLV-EF1aEGFP[2A]Puro-h FGF21,并于KMB17靶細胞中表達,為FGF21功能與特性的相關(guān)研究及基因工程藥物的探索和研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant lentivirus plasmid of human fibroblast growth factor 21(human fibroblast growth factor 21 (h FGF21), and to package and identify the recombinant plasmid. Methods the sequence of human FGF21 ORF was amplified by PCR and digested by Ecor R 鈪，

本文編號：2037335