本文選題：缺氧誘導因子-1α + 細胞紅蛋白�。� 參考：《河北醫(yī)科大學》2008年碩士論文

【摘要】： 目的:本實驗通過建立大鼠低壓缺氧損傷模型,采用RT-PCR和免疫熒光組織化學技術(shù),研究低壓缺氧性腦損傷后缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)和細胞紅蛋白(Cygb)在腦組織海馬區(qū)的表達部位及時序性變化特點,探討它們之間的相互關(guān)系以及在低壓缺氧性腦損傷中的作用。 方法:選用清潔級成年雄性SD大鼠60只,體重280~320克。隨機分為對照組及低壓缺氧6h、12h、18h和24h組。建立大鼠低壓缺氧損傷模型;H.E、甲苯胺蘭染色觀察腦組織形態(tài)學改變;物理方法檢測腦含水量;生化手段檢測腦組織SOD、CAT、NOS活性及MDA、NO含量。應用RT-PCR技術(shù)檢測大鼠腦海馬區(qū)HIF-1α和Cygb mRNA表達水平。采用免疫熒光雙標記技術(shù),利用激光共聚焦顯微鏡,觀察低壓缺氧腦損傷后HIF-1α和Cygb在大鼠海馬各區(qū)神經(jīng)細胞中的定位及時序性變化特點。 結(jié)果:1低壓缺氧損傷后腦組織形態(tài)學改變:腦冠狀切片H.E染色可見海馬CA1區(qū)對低壓缺氧最為敏感。低壓缺氧6h組CA1區(qū)大部分神經(jīng)細胞胞體縮小,胞核固縮,核仁消失,胞漿深染,同質(zhì)性嗜酸性著色(紅色神經(jīng)細胞);海馬CA2、CA3、CA4區(qū)以細胞水腫為主,神經(jīng)細胞胞體腫脹,胞漿不規(guī)則淡染,胞核腫大淡染或消失。低壓缺氧12h、18h和24h組海馬各區(qū)細胞均以壞死和凋亡為主;隨低壓缺氧時間的延長損傷逐漸加重�？梢姶蟛糠旨毎櫩s變形,胞漿深染,核碎裂及核溶解,間質(zhì)中充滿細胞碎片和凋亡小體。對照組甲苯胺蘭染色后神經(jīng)細胞胞核呈淡藍色,胞漿可見大量深藍色粗顆粒狀Nissl體。各低壓缺氧組H.E染色中所見的紅色神經(jīng)細胞,甲苯胺蘭染色呈均一深藍色,Nissl體消失;H.E染色胞體腫脹、胞漿淡染細胞,甲苯胺蘭染色整個細胞呈淡藍色,Nissl體減少或消失。 2腦含水量檢測結(jié)果:各低壓缺氧組腦含水量隨低壓缺氧時間的延長而逐漸增加,與對照組相比均有顯著差異(P0.01)。 3生化指標檢測結(jié)果:各低壓缺氧組腦組織中SOD、CAT活性隨低壓缺氧時間的延長而逐漸降低,與對照組相比均有顯著差異(P0.01);與對照組相比,各低壓缺氧組腦組織NOS活性均明顯升高(P0.01)。與對照組相比,低壓缺氧12h組MDA含量才出現(xiàn)明顯增加(P0.05);18h、24h組MDA含量顯著增加(P0.01),隨低壓缺氧時間的延長呈逐漸增加趨勢。與對照組相比,NO含量也隨低壓缺氧時間的延長逐漸增加,除低壓缺氧6h組外,其余各組NO含量均與對照組有顯著差異(P0.01)。 4 RT-PCR結(jié)果: (1) HIF-1α:對照組中HIF-1α無表達,低壓缺氧損傷后出現(xiàn)表達并隨時間的延長逐漸增高,表現(xiàn)出時間依賴特點。各低壓缺氧組與對照組相比均有顯著差異(P 0.01)。 (2) Cygb:對照組Cygb呈低表達;與對照組相比,低壓缺氧6h組(P0.05)和12h、18h、24h組(P 0.01)Cygb表達量均顯著增加,并表現(xiàn)出時間依賴特點。 5免疫熒光組織化學染色結(jié)果:HIF-1α免疫熒光陽性細胞呈綠色熒光,Cygb免疫熒光陽性細胞呈紅色熒光,兩者共定位顯示黃色熒光。對照組海馬各區(qū)均未見HIF-1α陽性表達;Cygb陽性信號出現(xiàn)在部分海馬錐形細胞胞漿及胞核,主要聚集于核膜和核仁周圍,海馬各區(qū)均有表達。低壓缺氧6h組海馬各區(qū)部分錐形細胞胞漿出現(xiàn)HIF-1α陽性表達;Cygb表達增加,軸突及樹突中也出現(xiàn)陽性信號。低壓缺氧12h組海馬區(qū)大部分細胞皺縮變形,胞核固縮或破裂;胞漿及胞核區(qū)均可見HIF-1α陽性表達;Cygb表達進一步增加。18 h和24h組HIF-1α和Cygb均高表達;雖然大量錐形細胞壞死和凋亡,胞核碎裂或溶解,仍可見HIF-1α陽性信號主要集中于胞核區(qū);Cygb在胞核區(qū)和胞漿中表達均顯著增加。 結(jié)論:1形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn),低壓缺氧可造成大鼠腦組織海馬區(qū)錐形細胞損傷,包括細胞水腫、壞死、凋亡和Nissl體減少或消失;其損傷程度隨低壓缺氧時間的延長而加重。海馬各區(qū)損傷程度不同,CA1區(qū)對低壓缺氧最為敏感,損傷最嚴重;CA2、CA3、CA4區(qū)損傷依次減輕。2低壓缺氧后大鼠腦含水量增加,出現(xiàn)腦水腫,且腦水腫的嚴重程度隨低壓缺氧時間的延長而加劇。3低壓缺氧造成大鼠腦組織細胞氧化應激損傷。SOD和CAT活性降低而MDA蓄積增加;NOS活性升高導致NO含量顯著增加。4正常時HIF-1α在海馬區(qū)神經(jīng)細胞中無表達;低壓缺氧損傷后首先在胞漿出現(xiàn)陽性表達,隨著低壓缺氧損傷的持續(xù)表達逐漸增加并出現(xiàn)明顯的胞核聚集趨勢。提示HIF-1α產(chǎn)生于胞漿,但聚集于胞核內(nèi)作為轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合DNA而起效。5正常時Cygb在海馬區(qū)神經(jīng)細胞的胞核、胞漿均有少量表達,主要集中于核膜和核仁周圍。隨著低壓缺氧損傷的持續(xù),Cygb表達大量增加,其陽性信號遍布胞體和突起中。Cygb在神經(jīng)細胞胞漿和胞核中均出現(xiàn)表達,并隨減壓缺氧時間的延長而表達增加,提示其不僅作為攜氧球蛋白在胞漿中發(fā)揮作用,可能也作為一種核轉(zhuǎn)錄因子起到基因調(diào)控作用。6低壓缺氧后大鼠腦組織海馬區(qū)神經(jīng)細胞中HIF-1α和Cygb表達的分布及時序性變化特點,提示Cygb可能通過HIF-1α途徑轉(zhuǎn)錄激活,二者關(guān)系密切,共同參與低壓缺氧性腦損傷的保護。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between hypoxia - inducible factor - 1偽 ( HIF - 1偽 ) and cygb ( Cygb ) in the hippocampus of low - pressure hypoxic brain by establishing a model of low - pressure hypoxic injury in rats , and to explore the relationship between hypoxia - inducible factor - 1偽 ( HIF - 1偽 ) and cygb in the hippocampus of brain tissue .


Methods : 60 adult male SD rats weighing 280 - 320 g were randomly divided into two groups : control group and low - pressure hypoxia 6h , 12h , 18 h and 24h group .


Results : The morphological changes of brain tissue after low - pressure hypoxia injury were the most sensitive to low - pressure hypoxia in CA1 region of hippocampus .


The results showed that the brain water content of each low - pressure hypoxic group gradually increased with the prolongation of the low - pressure hypoxia time , which was significantly different from that of the control group ( P0.01 ) .


Compared with the control group , the content of NO in brain tissue of low - pressure hypoxia group increased significantly ( P0.01 ) . Compared with the control group , the content of NO in brain tissue of low - pressure hypoxia group increased significantly ( P0.01 ) . Compared with the control group , the NO content increased gradually with the prolongation of low - pressure hypoxia time . Compared with the control group , the NO content increased gradually with the prolongation of the low - pressure hypoxia time , except for the low - pressure hypoxia group 6h group , the content of NO in the remaining groups was significantly different from that of the control group ( P0.01 ) .


4 RT - PCR Results :


( 1 ) HIF - 1偽 : HIF - 1偽 was not expressed in the control group , and the expression of HIF - 1偽 in the control group was gradually increased with the prolongation of time .


( 2 ) Cygb : The Cygb expression in the control group was lower than that of the control group . Compared with the control group , the expression of Cygb in the low - pressure hypoxia group was significantly increased ( P0.05 ) and 12h , 18 h and 24h ( P 0.01 ) .


Results : The expression of HIF - 1偽 was observed in the hippocampus , and the expression of HIF - 1偽 was observed in the cytoplasm and nucleus of the hippocampus .


Conclusion : The expression of HIF - 1偽 and Cygb in the hippocampus of rats with low pressure and hypoxia increased . The expression of HIF - 1偽 and Cygb in the hippocampus of rats with low pressure and hypoxia increased significantly . The expression of HIF - 1偽 and Cygb in the hippocampus of the rats with low pressure and hypoxia increased .
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R361.2

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本文編號：1945777