本文選題：重組豬IFN-α + 重組蛋白��； 參考：《甘肅農(nóng)業(yè)大學》2009年碩士論文

【摘要】： IFN-α(interferon alpha,IFN-α)是在特定誘生劑的作用下由細胞產(chǎn)生的一種具有生物活性的糖蛋白,可誘導同種動物細胞產(chǎn)生廣譜的抗病毒活性。目前已發(fā)現(xiàn)近百種疫病能通過動物傳染給人,其中很多為病毒性傳染病,有些目前尚未發(fā)現(xiàn)合適的疫苗和藥物來預防和治療,有些對病毒的生物學特性仍未研究清楚。IFN-α是抗病毒能力最強的干擾素,但無論是醫(yī)學還是獸醫(yī)學領域?qū)FN-α臨床應用仍然極為有限,因此開展IFN-α單克隆抗體的研制,為評價機體抗病毒水平以及IFN-α作用機制研究奠定基礎,對推動IFN-α在臨床上廣泛應用具有重要作用。 本研究運用雜交瘤細胞技術,以重組豬IFN-α蛋白免疫BALB/c小鼠,無菌條件下制備小鼠免疫脾細胞,與骨髓瘤細胞SP2/0細胞融合,通過通過GST和GST-pIFN-α雙重篩選和多次克隆化培養(yǎng),成功獲得了3株能分泌抗IFN-α的單克隆雜交瘤穩(wěn)定細胞株。用單克隆抗體亞型鑒定試劑盒鑒定其亞型,確定1株單克隆抗體為IgG2a,2株單克隆抗體為IgG2b。將分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株的染色體計數(shù),發(fā)現(xiàn)雜交瘤細胞株染色體平均數(shù)為92條,而骨髓瘤細胞株染色體平均數(shù)僅為66條,從遺傳角度證明確實獲得了雜交瘤細胞株;雜交瘤細胞腹水和細胞上清經(jīng)ELISA檢測,腹水中3株雜交瘤分泌單抗的效價均可達1:105,而細胞上清的效價可達到1:104;單抗的抗原結合位點分析表明,3株單抗的抗原結合位點基本一致;SDS-PAGE結果顯示,3株單抗的重鏈分子量均在60ku以上,輕鏈分子量在30ku以上;在雜交瘤細胞的穩(wěn)定性試驗中,3株細胞經(jīng)3次克隆化培養(yǎng),細胞上清中的抗體效價均在1:104～1:105之間,說明該3株雜交瘤細胞分泌單抗的能力穩(wěn)定,具有較好的遺傳穩(wěn)定性。
[Abstract]:IFN- 偽 interferon alpha-IFN- 偽) is a bioactive glycoprotein produced by cells under the action of a specific inducer, which can induce a broad spectrum of antiviral activity in the same species of animal cells. At present, it has been found that nearly 100 kinds of epidemic diseases can be transmitted to people through animals, many of which are viral infectious diseases. Some of them have not yet found suitable vaccines and drugs to prevent and treat them. Some of the biological characteristics of the virus have not been studied clearly. IFN- 偽 is the most potent antiviral interferon, but the clinical application of IFN- 偽 in both medicine and veterinary medicine is still very limited. Therefore, the development of monoclonal antibodies against IFN- 偽 has been carried out. It lays a foundation for evaluating the level of anti-virus and the mechanism of IFN- 偽, and plays an important role in promoting the wide application of IFN- 偽 in clinic. In this study, BALB/c mice were immunized with recombinant porcine IFN- 偽 protein by hybridoma cell technique. Spleen cells were prepared under sterile conditions and fused with myeloma cell line SP2/0 cells. GST and GST-pIFN- 偽 double screening and multiple cloning culture were used. Three monoclonal hybridoma stable cell lines secreting anti IFN- 偽 were successfully obtained. The subtypes were identified by using monoclonal antibody subtype identification kit, and one monoclonal antibody was identified as IgG2a2 and two monoclonal antibodies were IgG2b. The chromosome count of hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies showed that the average chromosome number of hybridoma cell lines was 92, while the average chromosome number of myeloma cell lines was 66. From the genetic point of view, hybridoma cell lines were obtained. Ascites and supernatants of hybridoma cells were detected by ELISA. The titers of McAbs secreted by three strains of hybridoma in ascites were 1: 105, while the titers of supernatants reached 1: 104.The antigen-binding sites of McAbs were basically consistent with those of SDS-PAGE. The molecular weight of the chain is above 60ku. The molecular weight of light chain was above 30ku, and in the stability test of hybridoma cells, the antibody titers in the supernatant were between 1: 104 and 1: 105, which indicated that the monoclonal antibody secreted by the three hybridoma cells was stable, and the antibody titers in the supernatant were between 1: 104 and 1: 105, which indicated that the three hybridoma cells had stable ability to secrete monoclonal antibodies. It has good genetic stability.
【學位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 許祥裕,朱敏生,潘英,沈月,朱東亞,朱有華;誘生型一氧化氮合酶抗體的制備與初步應用[J];中國生化藥物雜志;2001年04期

2 吳海濤,胡云龍,陳松,刁振宇,金麗娜,李潔,張雙全;重組蛋白在中國倉鼠卵巢細胞中高效表達的影響因素[J];中國生物工程雜志;2004年08期

3 洪艷,陳勇,楊連華,王怡婷,經(jīng)絡,胡華軍;戊型肝炎病毒嵌合蛋白的免疫應答的初步研究[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2005年09期

4 劉洪波;范學工;黃建軍;李寧;應若素;彭建平;;重組蛋白rhTRAIL_(55-281)與GST-rhTRAIL_(55-281)有肝細胞毒性[J];世界華人消化雜志;2006年09期

5 盧晶;戴星;孟繼鴻;;不同基因型戊型肝炎病毒重組抗原p166用于抗體檢測的價值[J];中華微生物學和免疫學雜志;2006年04期

6 耿義群;傅玉才;徐小虎;王偉;許錦階;;大鼠Sirt1基因原核表達質(zhì)粒的構建及融合蛋白表達[J];中國老年學雜志;2007年05期

7 呂剛;胡旭初;黃燦;李艷文;徐勁;吳忠道;余新炳;;日本血吸蟲乳酸脫氫酶原核表達、純化及鑒定[J];中國公共衛(wèi)生;2007年10期

8 許建;李世崇;陳昭烈;;逆轉錄病毒表達系統(tǒng)及其在外源蛋白高效表達中的應用[J];中國生物工程雜志;2008年05期

9 任道鋒;崔晶;王中全;韓化敏;;旋毛蟲抗原基因Ts43原核表達及重組蛋白鑒定[J];中國人獸共患病學報;2008年06期

10 王健;師志云;趙巍;;細粒棘球蚴延伸因子-1重組蛋白對小鼠的免疫保護性研究[J];中國藥房;2008年31期

相關會議論文 前10條

1 阮冰;馬亦林;陳勇;洪艷;;重組蛋白與合成肽抗原對戊型肝炎的診斷價值比較[A];2004年浙江省傳染病、肝病學術會議論文匯編[C];2004年

2 蔣雯婷;王全喜;吳雙秀;;萊茵衣藻海藻糖水解酶基因treh在E．coli 中的表達及功能鑒定[A];中國海洋湖沼學會藻類學分會第七屆會員大會暨第十四次學術討論會論文摘要集[C];2007年

3 樂瑛瑛;張德福;周前進;張紅麗;杜愛芳;;旋毛蟲絲氨酸蛋白酶抑制因子的體外表達及抗原性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十一次學術研討會論文集[C];2011年

4 史利軍;李剛;張錦秀;;PCV-2 Cap蛋白截短基因的表達及間接ELISA檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學術研討會論文集（上冊）[C];2009年

5 于敏;侯桂華;;小鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)在大腸桿菌中的表達及純化[A];山東免疫學會、山東微生物學會醫(yī)學微生物學專業(yè)委員會、山東省醫(yī)學會微生物學和免疫學專業(yè)委員會、山東省醫(yī)藥生物技術學會2001年學術年會論文匯編[C];2001年

6 張向穎;劉芳;謝立;修冰水;張賀秋;;肝癌診斷標志物高爾基體蛋白73基因在大腸桿菌中的表達[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學術研討會論文匯編[C];2011年

7 陶惠然;莊國洪;苗乃全;李文珠;陳福;張佳揩;;DcR3重組蛋白對糖尿病大鼠重要器官細胞凋亡相關分子表達的影響[A];中國病理生理學會受體、腫瘤和免疫專業(yè)委員會聯(lián)合學術會議論文匯編[C];2010年

8 洪艷;陳勇;楊連華;王怡婷;經(jīng)絡;胡華軍;;戊型肝炎病毒嵌合蛋白的免疫應答的初步研究[A];2005年浙江省醫(yī)學病毒學、醫(yī)學微生物與免疫學學術會議論文匯編[C];2005年

9 陳禮平;饒青;陳森;田征;邢海燕;劉向榮;王敏;王建祥;;重組蛋白hCD80/anti-CD19 scFv抗B細胞白血病的作用研究[A];第11次中國實驗血液學會議論文匯編[C];2007年

10 王震宇;成彩蓮;陳勇;趙雪花;吳勉云;何麗婭;;龍葵蛋白酶抑制劑的原核表達及其生化特性[A];湖北省暨武漢市生物化學與分子生物學學會第八屆第十七次學術年會論文匯編[C];2007年

相關重要報紙文章 前10條

1 劉成剛　左朝勝;復能與羅氏攜手人類重組蛋白研發(fā)[N];科技日報;2006年

2 葉國標;為國家一級產(chǎn)業(yè)化項目找婆家[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2001年

3 白毅;我國首獲旋毛蟲新基因[N];中國醫(yī)藥報;2005年

4 段煉煉邋葉頌濤;雙鷺藥業(yè)(002038) 進入高成長期可謂水到渠成[N];中國證券報;2007年

5 李寧 張磊 湯;基因工程新藥的誕生將在制藥業(yè)掀起一場革命[N];大眾科技報;2006年

6 白毅;生物技術藥物研發(fā)：百舸爭流競上游[N];中國醫(yī)藥報;2007年

7 王再陽 趙傳玉 王朝霞;勇攀科技巔峰[N];科技日報;2003年

8 本報實習記者　 魏帆;動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術有待突破[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 王越;江蘇吳中 橫向整理[N];證券時報;2007年

10 健康時報記者 白軼南;雙靶點掐斷腫瘤生長后路[N];健康時報;2007年

相關博士學位論文 前10條

1 李曉霞;基因重組蛋白誘導多能干細胞基礎研究[D];暨南大學;2011年

2 常華;鴨瘟病毒gE基因功能初步研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2011年

3 劉雙全;梅毒螺旋體Tp0751黏附蛋白的免疫活性及在梅毒致病中的作用研究[D];中南大學;2010年

4 陳禮文;人CD83分子單克隆抗體與重組蛋白制備及其抑制T細胞功能的機制研究[D];蘇州大學;2011年

5 郝軍元;凋亡素重組蛋白導向治療腫瘤的研究[D];吉林大學;2006年

6 許麗萍;脂蛋白（a）與A群鏈球菌的相互作用[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2010年

7 韓增勝;腺病毒介導的人乳鐵蛋白基因在兔和羊乳腺中高效表達的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2006年

8 龍福泉;梅毒螺旋體膜蛋白的表達、純化及其免疫活性的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2012年

9 盧愛桃;STLV-1/BV重組蛋白ELISA診斷試劑盒的研發(fā)及液相芯片診斷方法的建立[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2008年

10 蔡澤駿;綠僵菌海藻糖合成酶1基因克隆、表達及酶學特性研究[D];重慶大學;2009年

相關碩士學位論文 前10條

1 劉雙全;梅毒螺旋體Tp0453重組蛋白的表達、純化及免疫活性研究[D];南華大學;2005年

2 張海英;矮牽�；ㄏ慊駼SMT3cDNA克隆與原核表達[D];四川大學;2007年

3 李玉彬;重組人心肌肌鈣蛋白Ⅰ基因工程菌的構建[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

4 和燕玲;豬a-干擾素單克隆抗體的制備及其特性鑒定[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2009年

5 郭元元;外源性S100A8對宮頸癌細胞系Hela的生物學作用及機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

6 喬偉振;丙型肝炎病毒不同基因型不同區(qū)域重組蛋白的抗原性分析及應用[D];東南大學;2004年

7 劉娟;人甲狀旁腺激素在大腸桿菌中的表達[D];昆明理工大學;2005年

8 畢立清;抗人胰島素樣生長因子-1單克隆抗體的制備與鑒定[D];南京醫(yī)科大學;2008年

9 朱潔;重組人Bikunin結構域Ⅰ在畢赤酵母中表達的研究[D];吉林大學;2009年

10 劉大斌;抗-αvβ3scFv-sTF雙功能融合蛋白的可溶性表達及其特性研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2010年

，

本文編號：1941954