發(fā)布時間：2018-05-21 01:33

  本文選題：骨髓間充質(zhì)干細胞 + 生長因子　； 參考：《安徽醫(yī)科大學》2009年碩士論文

【摘要】： 目的分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs);并對轉(zhuǎn)化生長因子-β_1(rhTGF-β_1)和胰島素樣生長因子-Ⅰ(rhIGF-Ⅰ)誘導MSCs成軟骨分化的能力進行一般研究。 材料與方法新西蘭大白兔32只,雄性,月齡4～6月,體重2.5～3.5kg。任選其中一只行雙側(cè)髂骨穿刺抽取骨髓,分離骨髓MSCs,并行體外培養(yǎng),實驗分為實驗組與對照組。實驗組DMEM培養(yǎng)液中加入rhTGF-β_1和rhIGF-Ⅰ,對照組中未加入誘導因子。比較實驗組與對照組的細胞增殖情況和成軟骨分化情況。制備同種異體脫鈣骨基質(zhì)(DBM)作為支架材料。將體外培養(yǎng)的實驗組MSCs(P_3)負載到DBM中,構(gòu)建組織工程軟骨復合體,筋膜包裹后縫合固定到30只兔膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)行腔內(nèi)培養(yǎng)。分別于植入后4w、8w、12w各取10只標本進行組織學切片觀察及Ⅱ型膠原免疫組織化學觀測,并對結(jié)果進行分析。 結(jié)果實驗組中MSCs集落形成效率(20/10~6)明顯高于對照組(4/10~6)(u=3.326,P＜0.01)。實驗組細胞爬片做Ⅱ型膠原免疫組化檢測呈陽性,陽性細胞主要集中在細胞密度高的區(qū)域,胞質(zhì)內(nèi)可見棕黃色反應(yīng)物顆粒,對照組未見陽性細胞。制備得到的同種異體DBM為三維立體多孔結(jié)構(gòu),可塑性好并有適宜的機械強度。復合體在腔內(nèi)培養(yǎng)12w后,取出行組織學切片觀察及Ⅱ型膠原免疫組化觀測:HE染色見大量軟骨細胞增生,胞核染色呈藍色;甲苯胺藍染色見軟骨細胞成串排列,大量軟骨陷窩形成,周圍大量基質(zhì)包繞;Ⅱ型膠原免疫組織化學反應(yīng)見細胞外基質(zhì)中出現(xiàn)大量棕黃色顆粒,Ⅱ型膠原染色強陽性。 結(jié)論rhTGF-β_1和rhIGF-Ⅰ可促進MSCs增殖和成軟骨分化,MSCs與同種異體DBM結(jié)合后可在關(guān)節(jié)腔內(nèi)成功培養(yǎng)出組織工程軟骨。同種異體DBM符合組織工程軟骨支架材料的基本要求,有望成為一種理想的用于關(guān)節(jié)軟骨缺損修復的軟骨組織工程支架材料。
[Abstract]:Objective to isolate and culture bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs), and to study the ability of transforming growth factor- 尾 1 rhTGF- 尾 1) and insulin-like growth factor- 鈪，

本文編號：1917157