本文選題：骨髓間充質干細胞 + 間接接觸�。� 參考：《心臟雜志》2010年06期

【摘要】：目的:研究間接接觸共培養(yǎng)條件下骨髓間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌細胞(myocadium-lkce cells,CMs)的分化及相關調控基因的時序表達;篩選MSCs定向分化為CMs的重要調控基因。方法:將MSCs與CMs按1∶5的比例進行間接接觸共培養(yǎng),連續(xù)觀察兩周,在相差顯微鏡下觀察MSCs的形態(tài)變化。采用免疫熒光染色法檢測心肌特征性肌動蛋白α(α-actin)和心臟肌鈣蛋白T(cTnT)的表達。應用半定量RT-PCR分析TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C及TEF-1等相關調控基因在分化過程中的時序表達。結果:共培養(yǎng)后,MSCs的體積增大,其梭形形態(tài)逐漸變短變粗近似棒狀或橢圓形,細胞之間形成連接,排列方向趨于一致。共培養(yǎng)兩周時,α-actin及cTnT陽性細胞的比例分別為29.63%和27.38%。TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因在共培養(yǎng)后1 d表達開始增強,誘導后7 d達高峰,以后雖有所下降但仍維持在較高水平;TEF-1基因在誘導過程中表達無明顯變化。結論:間接接觸共培養(yǎng)條件下,MSCs可分化為心肌細胞。在此過程中,TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因可能是調控MSCs定向分化為心肌樣細胞的重要調控基因。
[Abstract]:Aim: to study the differentiation of mesenchymal stem cells from bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) to myocadium-lkce cells and the expression of related regulatory genes in vitro, and to screen the important regulatory genes for the differentiation of MSCs into CMs. Methods: MSCs and CMs were cocultured at 1:5 and observed for two weeks. The morphological changes of MSCs were observed under phase contrast microscope. The expression of cardiac characteristic actin 偽 (偽 -actinin) and cardiac troponin TcTnT were detected by immunofluorescence staining. Semi-quantitative RT-PCR was used to analyze the temporal expression of related regulatory genes, such as TGF- 尾 -nkx-2.5, GATA-4, MEF-2C and TEF-1, during differentiation. Results: after co-culture, the volume of MSCs increased, the fusiform of MSCs became shorter and thicker, similar to rod or ellipse, the cells formed connection, and the direction of arrangement tended to be the same. After two weeks of co-culture, the rates of 偽 -actin and cTnT positive cells were 29.63% and 27.38%, respectively. The expression of 偽 -actin and cTnT gene began to increase on the 1st day after co-culture, and reached the peak at 7 days after induction. However, the expression of TEF-1 gene remained unchanged at a higher level during induction. Conclusion: MSCs can differentiate into cardiomyocytes under indirect contact co-culture. During this process, TGF- 尾 -nkx-2.5 MEF-2C gene and GATA-4 gene may be the important regulatory genes to regulate the directional differentiation of MSCs into cardiomyocyte-like cells.
【作者單位】： 南昌大學第一附屬醫(yī)院心血管內科;南昌大學第一附屬醫(yī)院泌尿外科研究所;
【基金】：江西省衛(wèi)生廳重大招標項目資助(200602)
【分類號】：R329.21

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