本文選題：HBV + HCV��； 參考：《中南民族大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 病毒性肝炎是對(duì)人類健康危害嚴(yán)重的傳染病之一。由于HBV和HCV混合感染不僅是原發(fā)性肝癌發(fā)生的原因,也是導(dǎo)致肝組織纖維變,加快向肝硬化發(fā)展的重要因素。所以研究HBV、HCV的病理機(jī)制為臨床早期抗病毒干預(yù)治療,控制肝組織纖維化進(jìn)程,提供了理論依據(jù),對(duì)肝癌防治具有重要意義。 一般對(duì)HBV和HCV檢測(cè)有免疫學(xué)方法和核酸檢測(cè)法,免疫學(xué)方法主要包括放射性標(biāo)記免疫分析技術(shù)、酶免技術(shù)分析(ELISA)、時(shí)間分辨熒光免疫分析(TRFIA)和化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)等;核酸檢測(cè)方法主要有斑點(diǎn)雜交技術(shù)和PCR技術(shù),其中PCR技術(shù)檢測(cè)存在假陽性和假陰性的情況,本實(shí)驗(yàn)通過優(yōu)化PCR的檢測(cè)條件達(dá)到快速靈敏檢測(cè),降低假陽性和假陰性的目的。 本實(shí)驗(yàn)用已經(jīng)構(gòu)建好的pGEM-T-HBV(C區(qū)/C基因)和pGEM-T-HCV(核心蛋白)作為PCR檢測(cè)的質(zhì)粒模板,通過改變Mg~(2+)濃度、退火溫度以及采用不同的酶進(jìn)行PCR檢測(cè)條件的優(yōu)化。其中檢測(cè)HBV病毒時(shí)共設(shè)了1.5μl-4.0μl共6個(gè)Mg~(2+)濃度梯度,設(shè)了58.0～62.0℃共12個(gè)溫度梯度,質(zhì)粒模板稀釋濃度從10~(-1)-10~(-9)共9個(gè)濃度梯度。檢測(cè)HCV病毒時(shí),共設(shè)了1.5～2.0μl共6個(gè)Mg~(2+)濃度梯度,設(shè)了56.0～60.0℃共12個(gè)溫度梯度,質(zhì)粒模板稀釋濃度從10~(-1)～10~(-9)共9個(gè)濃度梯度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明檢測(cè)HBV病毒時(shí),4.0μl為最佳Mg~(2+)濃度,59℃為最佳退火溫度,天源公司的Taq DNA聚合酶靈敏性最高,對(duì)質(zhì)粒濃度的要求達(dá)到10~(-9)。當(dāng)檢測(cè)HCV病毒時(shí),1.5μl為最佳Mg~(2+)濃度,57℃為最佳退火溫度,Bio-Rad公司的iTaq聚合酶靈敏性最高,對(duì)質(zhì)粒濃度的要求達(dá)到10~(-6)。 藻膽體(phycobilisome)是存在于藍(lán)藻和紅藻中的一類捕光蛋白復(fù)合物,它由藻膽蛋白(phycobiliprotein)和連接蛋白組成。藻膽蛋白由藻膽色素(phycobilin)與相應(yīng)的脫輔基蛋白中保守性半胱氨酸的巰基以硫醚鍵共價(jià)結(jié)合而成。藻膽蛋白是一類結(jié)構(gòu)相似的色素蛋白。目前已發(fā)現(xiàn)了一種能催化β-CPC84、β-PEC84、α-APC82和β-APC82位半胱氨酸殘基與PCB連接的裂合酶基因cpeS,其編號(hào)為alr0617。為了研究PCB與層理鞭枝藻藻紅藍(lán)蛋白連接的機(jī)制β亞基(β-PEC)第84位Cys連接機(jī)制,現(xiàn)通過同源性分析,篩選出四個(gè)同源性較高的基因片段,即alr0617,all5339, all5292,alr0647�，F(xiàn)根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),將編號(hào)為alr0617,all5339,all5292,alr0647基因編碼的蛋白命名為CpeS1,CpeT1,CpeS2,CpeT2, CpeT1能分別與CpeT2、CpeS1、PecE形成比較明顯的復(fù)合物,但是只有CpeT1與CpeT2之間形成大約1:1的復(fù)合物。 本研究成功構(gòu)建質(zhì)粒pBT- CpeS1、pBT- CpeS2、pBT- CpeT2、pBT- 3357、pTRG- CpeS1、pTRG- CpeT_1、、pTRG- 3357基因。 將pBT- CpeS_1、pBT- CpeS_2、、pBT- CpeT_2、pBT- 3357和pTRG- CpeT_1;pBT- CpeS_1、pBT- CpeS_2、pBT- CpeT_2和pTRG- 3357;pBT- CpeS_2、、pBT- CpeT_2和pTRG- CpeS_1共轉(zhuǎn)化大腸桿菌,利用細(xì)菌雙雜交系統(tǒng),證明pBT- CpeT2、pBT-CpeS2、pBT-CpeS1和pBT-3357的重組子與pTRG-CpeT1的重組子有相互作用,pBT-CpeS2和pBT-CpeS1與pTRG-3357的重組子的蛋白質(zhì)間有相互作用,而pBT-CpeS2和pTRG-CpeS1間沒有相互作用。
[Abstract]:Viral hepatitis is a serious infectious diseases harmful to human health. Because of the mixture of HBV and HCV infection is not only the primary cause of liver cancer, but also cause the fibrosis of liver, accelerate the progression to liver cirrhosis. So the study of HBV, the pathogenesis of HCV for clinical early antiviral intervention treatment, control of liver tissue the process of fibrosis, provides a theoretical basis and has important significance for the prevention and treatment of liver cancer.
A general method of immunology and nucleic acid detection method for HBV and HCV detection of immunological methods includes radioactive labeled immunoassay analysis, enzyme immunoassay (ELISA), time-resolved fluorescence immunoassay (TRFIA) and chemiluminescence immunoassay (CLIA); nucleic acid detection methods include dot blot hybridization and PCR detection technology, which PCR there are false positive and false negative cases, to achieve rapid and sensitive detection by detecting the optimal conditions of PCR, reduce the false positive and false negative.
鏈疄楠岀敤宸茬粡鏋勫緩濂界殑pGEM-T-HBV(C鍖，

本文編號(hào)：1759269