本文選題：離子霉素 + Jurkat�。� 參考：《暨南大學》2009年碩士論文

【摘要】： 目的:通過研究離子霉素(Ionomycin)對Jurkat T細胞的增殖、細胞周期、活化、凋亡以及ERK1/2、磷酸化的ERK1/2(phosphorylation-ERK1/2,P-ERK1/2)的影響,探討離子霉素對Jurkat T細胞增殖調控中的作用。[方法]:MTT法檢測離子霉素在不同時間點對Jurkat T細胞增殖的影響;激光共聚焦顯微鏡下觀察不同濃度離子霉素及不同細胞增殖抑制劑對Jurkat T細胞集落形成的影響;MTT法檢測不同濃度離子霉素對Jurkat T細胞增殖的影響;MTT法比較不同信號通路特異性阻斷劑LY294002、AG490、GF109203X、Genistein、PD98059和離子霉素對Jurkat T細胞增殖的影響;碘化丙錠(propidiumiodide,PI)染色并結合流式細胞術分析比較離子霉素與其他細胞增殖抑制劑對Jurkat T細胞周期變化的影響;流式細胞術分析不同濃度離子霉素對Jurkat T細胞凋亡的影響;不同濃度離子霉素處理Jurkat T細胞,CD69-FITC、CD25-FITC、CD3-PE熒光標記單克隆抗體染色,流式細胞術分析不同濃度離子霉素對Jurkat T細胞表面活化標志CD69、CD25的影響;通過ELISA檢測經(jīng)不同濃度離子霉素處理的Jurkat T細胞上清中轉化生長因子β(TGF-β)的表達水平;通過Western Blot檢測不同時間下離子霉素對Jurkat T細胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達的影響及不同離子霉素對Jurkat T細胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達的影響并與PD98059比較,分析離子霉素在影響Jurkat T細胞增殖中的作用及與ERK1/2信號通路之間的關系;激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度離子霉素對Jurkat T細胞胞內Ca~(2+)的影響;激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度離子霉素對Jurkat T細胞胞內pH的影響。[結果]:離子霉素對JurkatT細胞增殖的抑制作用在48h后效果最明顯(P＜0.01);隨著離子霉素濃度從0.1 mg/L逐漸增至4.0 mg/L,Jurkat T細胞的增殖逐漸減弱,以4.0 mg/L離子霉素的抑制作用最為明顯(r=0.95,P＜0.01),且該濃度下,離子霉素對Jurkat T細胞增殖的抑制作用較PD98059、AG490、GF109203X和Genistein明顯(P＜0.05);離子霉素在濃度為0.1～8 mg/L時,可抑制Jurkat T細胞的集落形成;離子霉素可使Jurkat T細胞周期停滯于G0/G1期,阻止其進入S期并可促進Jurkat T細胞的凋亡;離子霉素對Jurkat T細胞的表面活化標志CD69的表達幾乎無影響,可輕微抑制CD25的表達;離子霉素可抑制Jurkat T細胞上清中TGF-β的表達,且與離子霉素的濃度有關;離子霉素在濃度為0.1～4 mg/L時,可使Jurkat T細胞胞內Ca~(2+)釋放出來(P＜0.01),且胞內pH升高(P＜0.01);離子霉素在1h時可顯著抑制Jurkat T細胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達。[結論]:離子霉素對Jurkat T細胞增殖有明顯的抑制作用并影響其集落形成,可使Jurkat T細胞周期停滯于G0/G1期,阻止其進入S期,且對Jurkat T細胞凋亡有顯著促進作用,對Jurkat T細胞的表面活化標志CD69無顯著影響,可輕微抑制CD25的表達;可抑制細胞上清中TGF-β的表達水平;可以顯著影響Jurkat T細胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白的表達,這些發(fā)現(xiàn)可為腫瘤疾病的治療和新的抗腫瘤藥物的開發(fā)提供新的靶點。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of ionomycin on the proliferation of T cells by MTT assay . The effects of different concentrations of ionomycin on the proliferation of T cells were investigated by MTT assay . The effects of different concentrations of ionomycin on the proliferation of T cells were investigated by MTT assay . The results showed that the inhibitory effect of ionomycin on the proliferation of T cells increased from 0.1 mg / L to 4.0 mg / L ( P < 0 . 05 ) . Conclusion : The effect of ionomycin on the proliferation of T cells and its colony formation can arrest the cell cycle arrest in G0 / G1 phase , prevent it from entering the S phase , and inhibit the expression level of TGF - 尾 .

【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R392

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