本文選題：紅細胞代用品　切入點：血紅蛋白　出處：《華東師范大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 抗氧化酶交聯(lián)的多聚血紅蛋白(PolyHb-SOD-CAT)是紅細胞代用品的一種,為了建立此代用品的制備方法,并對其理化特性、生物學(xué)安全性及抗氧化特性進行初步研究,我們從過期的人紅細胞中提取血紅蛋白(hemoglobin,Hb),并利用陰離子交換層析方法進行純化,采用戊二醛交聯(lián)法制備抗氧化酶交聯(lián)的多聚血紅蛋白;利用中空纖維超濾儀純化出300kD左右的多聚血紅蛋白,濃縮、無菌過濾,凍干后-20℃長期保存。 檢測PolyHb-SOD-CAT的粒徑,測定不同溫度時間保存下制品高鐵血紅蛋白(MetHb%)含量的變化;流式細胞術(shù)檢測制品與中性粒細胞孵育后細胞吞噬功能的變化以及制品對T淋巴細胞和血小板活化的影響;凝集試驗檢測血漿中凝血因子活力;Western Blot檢測制品輸注后在小鼠體內(nèi)的清除速率;ELISA檢測制品在小鼠體內(nèi)的抗原性。實驗結(jié)果顯示,MetHb%為6.61±1.42%,粒徑29nm;制品在4℃、24℃不同保存時間均呈自氧化穩(wěn)定,37℃8h顯示抗氧化酶交聯(lián)的多聚血紅蛋白比多聚血紅蛋白有更強的自氧化穩(wěn)定性;制品未明顯影響中性粒細胞吞噬功能,對T淋巴細胞和血小板沒有明顯活化作用;對凝血因子活性也沒有明顯影響;制品輸注后48h仍有檢出;PolyHb-SOD-CAT的抗原性較弱。 此外,為了研究PolyHb-SOD-CAT的抗氧化特性,我們利用過氧化氫(hydrogenperoxide,H_2O_2)對人臍靜脈內(nèi)皮細胞的氧化損傷建立了類似缺血再灌注損傷模型,化學(xué)比色法檢測細胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Ca~(2+)濃度,免疫組化技術(shù)檢測核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在細胞內(nèi)的分布,RT-PCR技術(shù)檢測血紅素氧化酶(hemeoxygenase,HO-1)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的mRNA表達情況,流式細胞術(shù)檢測細胞死亡情況。結(jié)果表明,與對照組相比,單加H_2O_2組的GSH濃度為0.0064±0.0039mmol/L,Ca~(2+)濃度為690.05±145.11nmol/ml,NF-kB大量位移入核,HO-1、eNOS的mRNA表達量上升,細胞死亡率高;而與單加H_2O_2組比,PolyHb-SOD-CAT+H_2O_2組的GSH濃度為0.0214±0.0098mmol/L,Ca~(2+)濃度為172.43±24.09nmol/ml,NF-κB絕大部分仍位于胞漿內(nèi),HO-1、eNOS的mRNA表達量明顯降低,細胞死亡率下降。PolyHb-SOD-CAT能夠抑制H_2O_2引起的血管內(nèi)皮細胞氧化損傷。 上述實驗結(jié)果表明,PolyHb-SOD-CAT是一種潛在的安全有效的紅細胞代用品,在一定程度上體現(xiàn)了抗氧化的優(yōu)越性,對于減輕缺血-再灌注損傷有重要作用。
[Abstract]:Poly (Hb-SOD-CAT), crosslinked by antioxidant enzymes, is a kind of erythrocyte substitute. In order to establish the preparation method of the substitute, the physical and chemical properties, biological safety and antioxidant properties of polyhemoglobin polyhemoglobin crosslinked by antioxidant enzyme were studied preliminarily. Hemoglobin HbBX was extracted from expired human red blood cells and purified by anion exchange chromatography. Poly hemoglobin crosslinked by glutaraldehyde was prepared by glutaraldehyde crosslinking method. Poly (hemoglobin) about 300kD was purified by hollow fiber ultrafiltration, concentrated, sterilized and preserved at -20 鈩，

本文編號：1655685