本文關(guān)鍵詞： 幽門(mén)螺桿菌 Tim Th免疫反應(yīng) 疫苗　出處：《南昌大學(xué)》2009年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】： 背景和目的: 機(jī)體的免疫反應(yīng)在幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori, H. pylori)致病和H. pylori疫苗的免疫保護(hù)中均起重要作用,因此闡明H. pylori感染的免疫致病機(jī)制和H. pylori疫苗的免疫保護(hù)機(jī)制,對(duì)于H. pylori相關(guān)性疾病的防治具有十分重要的意義。Th免疫反應(yīng)在H. pylori感染的免疫致病及疫苗的免疫保護(hù)中均起著重要作用。但是H. pylori感染和H. pylori疫苗接種究竟通過(guò)何種機(jī)制影響Th反應(yīng),目前尚不清楚。T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)分子(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule,Tim)是新近發(fā)現(xiàn)在T細(xì)胞表面的跨膜蛋白家族,它對(duì)CD4+T細(xì)胞分化成Th1和Th2細(xì)胞,調(diào)控效應(yīng)T細(xì)胞(Th1和Th2)的應(yīng)答起著重要作用,Tim-1和Tim-3是Tim家族中的兩個(gè)重要成員,它們分別在分化成熟的Th2和Th1細(xì)胞表達(dá),并參與Th免疫反應(yīng)的調(diào)控。H. pylori感染及疫苗接種對(duì)Tim的影響目前尚不清楚,為此本研究在體內(nèi)外觀察了H. pylori感染及疫苗接種后Tim-1及Tim-3的表達(dá),及其與Th1和Th2免疫反應(yīng)的關(guān)系,旨在初步探討H. pylori感染和H. pylori疫苗接種影響Th反應(yīng)的機(jī)制,為后續(xù)以Tim-1和Tim-3為靶點(diǎn)防治H. pylori感染和H. pylori相關(guān)性疾病提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: (1) H. pylori與小鼠脾淋巴細(xì)胞共培養(yǎng):以不同濃度的SS1 H. pylori活菌(0 CFU/ml、0.50×10~7CFU/ml、1.00×10~7CFU/ml、2.00×10~7CFU/ml、4.00×10~7CFU/ml)與原代分離的BALB/c小鼠脾淋巴細(xì)胞共培養(yǎng),分別在3h、6h、12h和24h點(diǎn)收集細(xì)胞。 (2)小鼠H. pylori感染模型建立和根除治療:6-8周齡的清潔級(jí)的BALB/c小鼠,給予含1.0×10~9/ml的SS1 H. pylori活菌液,0.5ml/只,灌胃,隔日一次,共5次。建立動(dòng)物模型后,隨機(jī)分為2組:H. pylori感染組:僅給予藥物賦形劑5%阿拉伯樹(shù)膠溶液;H. pylori根除組:給予洛賽克(質(zhì)子泵抑制劑,PPI)0.06 mg/次/只,羥氨芐青霉素2.9mg/次/只,克拉霉素1.5 mg/次/只和5%阿拉伯樹(shù)膠溶液。分別給予上述藥物每日2次灌胃,共2周。另設(shè)一正常對(duì)照組不給予H. pylori和任何藥物。停藥后4周,處死小鼠,取標(biāo)本待測(cè)。 (3) H. pylori疫苗免疫保護(hù)接種:6~8周齡的清潔級(jí)BALB/c小鼠隨機(jī)分為以下3組:正常對(duì)照組:不接種疫苗也不給予H. pylori攻擊;疫苗對(duì)照組:PBS溶液;疫苗免疫組:H. pylori抗原+殼聚糖顆粒+CT組,后二組于第0、7、14、21天灌胃各免疫1次,末次免疫后4周給予1.0×109CFU/ml的SS1 H. pylori菌液0.5ml/只進(jìn)行攻擊,隔日一次,共2次。4周后,處死小鼠,取標(biāo)本待測(cè)。 (4)各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè):①胃黏膜內(nèi)H. pylori的檢測(cè):采用改良Giemsa染色和H. pylori定量培養(yǎng);②血清抗H. pylori IgG1、IgG2a和胃黏膜內(nèi)IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-10含量的檢測(cè):采用間接ELISA法和雙抗體夾心ELISA法;③脾和淋巴細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)Tim-1和Tim-3 mRNA檢測(cè):采用RT-PCR方法。④Tim-3陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè):采用流式細(xì)胞術(shù)。 研究結(jié)果: (1) H. pylori對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞內(nèi)Tim-1及Tim-3表達(dá)的影響: ①H. pylori活菌作用小鼠淋巴細(xì)胞3h后對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞內(nèi)Tim-1 mRNA的表達(dá)無(wú)顯著影響(P0.05),但是在6h、12h和24h時(shí)不同濃度的H. pylori活菌作用小鼠淋巴細(xì)胞可顯著影響其Tim-1 mRNA的表達(dá)(P0.01,0.05,0.001)。在6h和12h時(shí),0.50×10~7CFU/ml和1.00×10~7CFU/ml濃度組顯著低于對(duì)照組(P0.05);但是在高濃度(2.00×10~7CFU/ml和4.00×10~7CFU/ml)時(shí),Tim-1 mRNA表達(dá)回升,與對(duì)照組無(wú)差別(P0.05),并高于低濃度組(P0.05,0.005)。在24h時(shí),在0.50×10~7CFU/ml至2.00×10~7CFU/ml濃度范圍內(nèi),隨著H. pylori活菌濃度增加,Tim-1 mRNA的表達(dá)下降,其中1.00×10~7CFU/ml和2.00×10~7CFU/ml組與對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.005);在高濃度組(4.00×10~7CFU/ml),Tim-1 mRNA表達(dá)回升,與對(duì)照組無(wú)差別(P0.05),并高于低濃度組(P0.005,0.001,0.001)。 ②H. pylori活菌作用小鼠淋巴細(xì)胞3h和24h后對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞內(nèi)Tim-3 mRNA的表達(dá)無(wú)顯著影響(P0.05),但是在6h和12h時(shí)不同濃度的H. pylori活菌作用小鼠淋巴細(xì)胞可顯著影響其Tim-3 mRNA的表達(dá)(P0.01,0.001),隨著H. pylori活菌濃度增加,Tim-3 mRNA的表達(dá)逐漸升高。在6h時(shí),2.00×10~7CFU/ml和4.00×10~7CFU/ml濃度組顯著高于對(duì)照組和0.50×10~7CFU/ml濃度組(P0.005,0.05)。在12h時(shí),2.00×10~7CFU/ml濃度組顯著高于對(duì)照組、0.50×10~7CFU/ml和1.00×10~7CFU/ml濃度組(P0.05),而4.00×10~7CFU/ml濃度組顯著高于對(duì)照組和其它各濃度組(P0.001,0.05)。 ③H. pylori活菌作用小鼠淋巴細(xì)胞3h后,其Tim-1/Tim-3 mRNA無(wú)顯著變化(P0.05);但是作用6h、12h和24h后,不同濃度的H. pylori活菌可顯著影響細(xì)胞Tim-1/Tim-3 mRNA的比值(P0.001,0.05,0.001)。在6h時(shí),0.50×10~7CFU/ml和1.00×10~7CFU/ml濃度組顯著低于對(duì)照組(P0.05,0.01);在12h時(shí),1.00×10~7CFU/ml濃度組顯著低于對(duì)照組(P0.005);在24h時(shí),0.50×10~7CFU/ml、1.00×10~7CFU/ml和2.00×10~7CFU/ml濃度組顯著低于對(duì)照組(P0.005,0.001,0.001)。在這3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的高濃度組(4.00×10~7CFU/ml),Tim-1/Tim-3 mRNA的比值回升,與對(duì)照組無(wú)差別(P0.05),并且高于低濃度組(P0.001)。 ④流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明,H. pylori活菌作用小鼠淋巴細(xì)胞24h后Tim-3陽(yáng)性細(xì)胞百分比無(wú)變化(P0.05),但是在6h和12h時(shí)不同濃度的H. pylori活菌作用小鼠淋巴細(xì)胞可顯著增加Tim-3陽(yáng)性細(xì)胞的百分比(P0.05)。在6h時(shí),4.00×10~7CFU/ml濃度組顯著高于對(duì)照組(P0.01)和0.50×10~7CFU/ml濃度組(P0.001),2.00×10~7CFU/ml濃度組顯著高于0.50×10~7CFU/ml濃度組(P0.05)。在12h時(shí),2.00×10~7CFU/ml濃度組顯著高于對(duì)照組(P0.05)、0.50×10~7CFU/ml(P0.005)和1.00×10~7CFU/ml濃度組(P0.05)。 (2)小鼠H. pylori感染和根除后Tim-1及Tim-3表達(dá)的變化: H. pylori感染組小鼠脾臟Tim-1 mRNA的表達(dá)顯著低于正常對(duì)照組(P0.05),H. pylori根除后小鼠脾臟Tim-1 mRNA的表達(dá)顯著增加,高于感染組(P0.05),與正常對(duì)照組無(wú)差別(P0.05)。H. pylori感染組小鼠脾臟Tim-3 mRNA的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組(P0.05),H. pylori根除后小鼠脾臟Tim-3 mRNA的表達(dá)顯著下降,低于感染組(P0.05),與正常對(duì)照組無(wú)差別(P0.05)。H.pylor感染小鼠脾臟Tim-1/Tim-3 mRNA顯著低于正常對(duì)照組(P0.05),H. pylori根除后小鼠脾臟Tim-1/Tim-3 mRNA顯著增加,高于感染組(P0.05),與正常對(duì)照組無(wú)差別(P0.05)。 (3)小鼠免疫保護(hù)疫苗接種后Tim-1及Tim-3表達(dá)的變化: 疫苗免疫組小鼠脾臟Tim-1和Tim-3 mRNA的表達(dá)均顯著高于正常對(duì)照組和疫苗對(duì)照組(P0.001~0.05)。疫苗對(duì)照組小鼠脾臟Tim-3 mRNA的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組(P0.05)。小鼠脾臟Tim-1/Tim-3 mRNA的比值在疫苗對(duì)照組顯著低于正常對(duì)照組(P0.05),而在疫苗免疫組此比值顯著增加,高于疫苗對(duì)照組(P0.001),與正常對(duì)照組無(wú)差別(P0.05)。 (4)小鼠H. pylori感染和根除后以及H. pylori疫苗接種各組Tim-1及Tim-3與Th免疫反應(yīng)的關(guān)系: 1)小鼠H. pylori感染和根除后Tim-1及Tim-3與Th免疫反應(yīng): ①血清抗H. pylori IgG1和IgG2a含量在H. pylori感染組及H. pylori根除組均顯著高于正常對(duì)照組(P0.001,0.01和0.05),在H. pylori感染組與H. pylori根除組之間無(wú)顯著差異(P0.05)。并且在各組小鼠脾臟Tim-1 mRNA的表達(dá)與血清抗H. pylori IgG1含量(反映Th2免疫反應(yīng))呈顯著正相關(guān)(P0.001,0.05),與血清抗H. pylori IgG2a含量(反映Th1免疫反應(yīng))無(wú)相關(guān)性(P0.05);而脾臟Tim-3 mRNA的表達(dá)與血清抗H. pylori IgG2a含量呈顯著正相關(guān)(P0.01,0.05),與血清抗H. pylori IgG1含量無(wú)相關(guān)性(P0.05)。 ②胃黏膜內(nèi)IL-4、IL-10和IL-12含量在對(duì)照組、H. pylori感染和根除組之間無(wú)顯著差異(P0.05),各組間IL-2和IFN-γ含量有顯著差異(P0.01,0.05)。進(jìn)行兩兩比較發(fā)現(xiàn),IL-2和IFN-γ含量在H. pylori感染組高于正常對(duì)照組和H. pylori根除組(P0.005,0.01和0.05),H. pylori根除組與正常對(duì)照組無(wú)差別(P0.05)。并且各組小鼠脾臟Tim-1 mRNA的表達(dá)與胃黏膜內(nèi)IL-4和IL-10(Th2細(xì)胞因子)含量呈顯著正相關(guān)(P0.005,0.01和0.05),與IL-2、IFN-γ和IL-12(Th1細(xì)胞因子)含量無(wú)相關(guān)性(P0.05);而脾臟Tim-3 mRNA的表達(dá)與胃黏膜內(nèi)IL-2、IFN-γ和IL-12含量呈顯著正相關(guān)(P0.005,0.05),與IL-4和IL-10含量無(wú)相關(guān)性(P0.05)。 2)小鼠疫苗接種各組Tim-1及Tim-3與Th免疫反應(yīng): ①血清抗H. pylori IgG1和IgG2a含量在H. pylori疫苗接種組均顯著高于疫苗對(duì)照組與正常對(duì)照組(P0.001),血清中抗H. pylori IgG1含量在疫苗對(duì)照組還顯著高于與正常對(duì)照組(P0.01)。并且在各組小鼠脾臟Tim-1 mRNA的表達(dá)與血清抗H. pylori IgG1含量呈顯著正相關(guān)(P0.05),與血清抗H. pylori IgG2a含量無(wú)相關(guān)性(P0.05);而脾臟Tim-3 mRNA的表達(dá)與血清抗H. pylori IgG2a含量呈顯著正相關(guān)(P0.001,0.05),與血清抗H. pylori IgG1含量無(wú)相關(guān)性(P0.05)。 ②疫苗接種各組間胃黏膜內(nèi)IL-4含量無(wú)顯著差異(P0.05);IL-10、IL-2、IFN-γ和IL-12含量有顯著差異(P0.001,0.005),疫苗免疫組均高于正常對(duì)照組和疫苗對(duì)照組(P0.001,0.005和0.05),IFN-γ和IL-12含量在疫苗對(duì)照組顯著高于正常對(duì)照組(P0.01和0.05),IL-10含量在疫苗對(duì)照組顯著低于正常對(duì)照組(P0.05)。并且在各組小鼠脾臟Tim-1 mRNA的表達(dá)與胃黏膜內(nèi)IL-4和IL-10含量呈顯著正相關(guān)(P0.001,0.005,0.01和0.05),與IL-2、IFN-γ和IL-12含量無(wú)相關(guān)性(P0.05);而脾臟Tim-3 mRNA的表達(dá)與胃黏膜內(nèi)IL-2、IFN-γ和IL-12含量呈顯著正相關(guān)(P0.005,0.01和0.05),與IL-4和IL-10含量無(wú)相關(guān)性(P0.05)。 結(jié)論: 1. H. pylori在體外可下調(diào)小鼠淋巴細(xì)胞Tim-1的表達(dá),上調(diào)Tim-3的表達(dá),并降低Tim-1/Tim-3比值,提示它可抑制T淋巴細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化,促進(jìn)T淋巴細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化,誘導(dǎo)Th1優(yōu)勢(shì)的免疫反應(yīng)。 2.在體內(nèi)H. pylori感染能下調(diào)小鼠脾臟內(nèi)Tim-1的表達(dá),上調(diào)Tim-3的表達(dá),使Tim-1/Tim-3比值下降,而H. pylori根除后Tim-1表達(dá)回升,Tim-3表達(dá)下降,Tim-1/Tim-3比值上升,提示H. pylori感染可誘導(dǎo)Th1優(yōu)勢(shì)的免疫反應(yīng),而H. pylori根除后可逆轉(zhuǎn)H. pylori感染所致的Th1優(yōu)勢(shì)的免疫反應(yīng)。 3. H. pylori疫苗接種后可上調(diào)小鼠脾臟Tim-1和Tim-3 mRNA的表達(dá),使Tim-1/Tim-3比值上升,提示H. pylori疫苗接種可誘導(dǎo)Th1和Th2混合免疫反應(yīng),并可逆轉(zhuǎn)H. pylori感染所致的Th2反應(yīng)抑制,恢復(fù)Th1/Th2免疫反應(yīng)的平衡。 4.在H. pylori感染和疫苗接種各組Tim-1的表達(dá)與反映Th2免疫反應(yīng)的抗H. pylori IgG1含量和Th2細(xì)胞因子含量呈正相關(guān),而與反映Th1免疫反應(yīng)的抗H. pylori IgG2a含量和Th1細(xì)胞因子含量無(wú)顯著相關(guān)性;Tim-3的表達(dá)則反之,說(shuō)明在H. pylori感染和疫苗接種時(shí)Tim-1和Tim-3的表達(dá)能較好的反映Th2和Th1免疫反應(yīng),這為后續(xù)以Tim-1和Tim-3為靶點(diǎn)防治H. pylori感染和H. pylori相關(guān)性疾病提供了依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R573;R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 謝勇;周南進(jìn);熊水印;陳江;龔燕鋒;呂農(nóng)華;王崇文;;殼聚糖體內(nèi)抗幽門(mén)螺桿菌作用及其對(duì)Th免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)[J];中華內(nèi)科雜志;2007年03期

2 謝勇,龔燕鋒,周南進(jìn),陳江,周小江,呂農(nóng)華,王崇文;胃黏膜局部免疫反應(yīng)在以殼聚糖為佐劑的幽門(mén)螺桿菌疫苗免疫保護(hù)中的作用[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年37期

3 謝勇;周南進(jìn);陳江;熊水印;龔燕鋒;呂農(nóng)華;王崇文;;殼聚糖的抗幽門(mén)螺桿菌作用及其對(duì)胃黏膜炎癥的影響[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2006年42期

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本文編號(hào)：1512327