本文關(guān)鍵詞： 衰老 微環(huán)境 骨髓基質(zhì)細(xì)胞 免疫印跡法 大鼠　出處：《解剖學(xué)報(bào)》2015年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討衰老大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)的生物學(xué)特點(diǎn),為闡釋機(jī)體衰老對(duì)造血誘導(dǎo)微環(huán)境的影響提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法雄性健康SD大鼠隨機(jī)分為正常組和衰老模型組。衰老模型組:大鼠皮下注射D-半乳糖120mg/kg,qd×42;正常對(duì)照組:大鼠皮下注射等時(shí)與等量生理鹽水。衰老動(dòng)物復(fù)制完成后第2天,分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BMNCs)進(jìn)行髓系造血祖細(xì)胞混合集落生成單位(CFU-Mix)培養(yǎng)。采用全骨髓貼壁法培養(yǎng)和傳代BMSCs,取第3代細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),CCK-8法測(cè)定BMSCs增殖能力;流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期;衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色觀察衰老BMSCs百分率;ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中白細(xì)胞介素(IL)-6、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF)含量;DCFH-DA熒光染色流式檢測(cè)BMSC活性氧簇(ROS)水平;酶學(xué)法檢測(cè)BMSCs內(nèi)過(guò)氧化物丙二醛(MDA)含量和總超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blotting檢測(cè)衰老相關(guān)蛋白P16、P21、P53表達(dá)。結(jié)果與對(duì)照組相比衰老模型組大鼠CFU-Mix集落形成數(shù)量明顯降低;BMSCs增殖能力顯著下降;處于G0/G1期的BMSCs比例增高、S期細(xì)胞比例降低,細(xì)胞阻滯于G1期;SA-β-Gal染色陽(yáng)性的BMSCs百分率顯著上升;BMSCs培養(yǎng)上清液中IL-6、SCF含量明顯下降;BMSC內(nèi)ROS、MDA氧化損傷指標(biāo)上升,SOD抗氧化指標(biāo)下降;衰老相關(guān)蛋白P16、P21、P53表達(dá)明顯上調(diào)。結(jié)論衰老大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)衰老相關(guān)生物學(xué)改變,其機(jī)制可能與氧化損傷激活衰老信號(hào)通路有關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the biological characteristics of bone marrow stromal cells (BMSCs) in aging rats. Methods male SD rats were randomly divided into normal group and aging model group. Aging model group: rats were injected subcutaneously with D-galactose 120 mg / kg QD 脳 42; normal control group. Rats were subcutaneously injected with the same amount of saline as normal saline. Bone marrow mononuclear cells (BMNCs) were isolated from bone marrow mononuclear cells (BMNCs) and cultured with mixed colony forming units (CFU-Mix) of myeloid hematopoietic progenitor cells. BMSCs were cultured and subcultured by whole bone marrow adherent method. The third passage cells were used to detect the proliferative ability of BMSCs by CCK-8 method, and the cell cycle was analyzed by flow cytometry. Senescence associated 尾 -galactosidase SA- 尾 -galactosidase staining was used to observe the percentage of senescent BMSCs and Elisa to detect the level of IL-6 in the supernatant of cell culture. The content of stem cell growth factor (SCF-1) and the level of BMSC reactive oxygen species (ROSs) were detected by flow cytometry and DCFH-DA fluorescence staining. The content of malondialdehyde (MDA) and the activity of total superoxide dismutase (SOD) in BMSCs were detected by enzyme method. Western blotting was used to detect the expression of senescence related protein P16, P21, and p53. Results compared with the control group, the number of CFU-Mix colony formation in aging model group was significantly decreased. The proliferative ability decreased significantly. The proportion of BMSCs in G _ 0 / G _ 1 phase increased and the percentage of cells in S phase decreased, while the percentage of BMSCs cells blocked in G _ 1 phase was significantly increased. The content of IL-6 BMSCs in the supernatant of BMSCs culture was significantly decreased. Conclusion Aging related biological changes in bone marrow stromal cells of aging rats may be related to the activation of aging signaling pathway by oxidative injury.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)組織學(xué)胚胎學(xué)教研室;重慶醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81173398) 重慶市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)基礎(chǔ)與前沿研究項(xiàng)目(cstc2014jcyj A10001)
【分類號(hào)】：R-332;R339.38

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