本文關(guān)鍵詞： 呼吸道合胞病毒 NLRC5 MHC I 單克隆抗體　出處：《南京大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)為負(fù)義單鏈RNA病毒,是導(dǎo)致嬰幼兒下呼吸道感染的主要病原體,主要引起毛細(xì)支氣管炎和肺炎。嬰幼兒RSV感染與青少年期過(guò)敏性哮喘的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),是誘發(fā)哮喘的高危因素。環(huán)境以及基因因素可能與這一現(xiàn)象有關(guān),但是具體原因不清。細(xì)胞免疫在RSV感染清除和致病方面具有重要作用,其中CD8+T淋巴細(xì)胞是清除感染的主要效應(yīng)細(xì)胞。CD8+T細(xì)胞通過(guò)與MHC I分子相互作用識(shí)別并殺傷宿主細(xì)胞,在清除感染的同時(shí)也付出了免疫損傷的代價(jià)。宿主細(xì)胞感染RSV后,MHC I分子表達(dá)明顯升高,增強(qiáng)了CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫殺傷反應(yīng),是RSV感染造成免疫損傷的主要原因。本論文主要研究了呼吸道合胞病毒感染調(diào)控NLRC5表達(dá)及其意義。NLRC5是天然免疫識(shí)別受體NLRs家族中新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)蛋白,由1866個(gè)氨基酸殘基組成。為了檢查NLRC5在RSV感染過(guò)程中的表達(dá),我們首先制備了NLRC5的多抗和單克隆抗體。通過(guò)抗原分析,我們選取NLRC5 C-端含258個(gè)氨基酸殘基的蛋白片段作為抗原,然后在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)制備了相應(yīng)的重組蛋白,分別免疫新西蘭兔和小鼠,分別制備了多抗和單克隆抗體。單克隆抗體的特異性通過(guò)ELISA篩選,免疫印跡方法驗(yàn)證表明該抗體具有特異識(shí)別人源NLRC5的能力。我們利用這些試劑對(duì)RSV感染過(guò)程中NLRC5表達(dá)以及MHCI分子的表達(dá)調(diào)控進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)RSV感染通過(guò)誘導(dǎo)干擾素釋放以及病毒雙鏈RNA兩個(gè)通路誘導(dǎo)了NLRC5表達(dá)。RSV感染過(guò)程中NLRC5表達(dá)與MHC I上調(diào)的關(guān)系通過(guò)兩種方法驗(yàn)證：1)外源性過(guò)表達(dá)NLRC5可以明顯促進(jìn)MHC I表達(dá)；2)siRNA抑制NLRC5表達(dá)可以明顯降低RSV感染過(guò)程中MHC I的表達(dá)。綜上所述,本文首次證明了RSV感染可以顯著誘導(dǎo)NLRC5表達(dá),并且初步闡述了NLRC5在RSV感染過(guò)程中調(diào)控MHC I表達(dá)的重要作用,這可能是RSV所致免疫病理?yè)p傷以及誘發(fā)哮喘的潛在原因。
[Abstract]:Respiratory syncytial virus Respiratory syncytial virus (RSVV) is a negative sense single-stranded RNA virus. Infantile RSV infection is the main pathogen of infantile lower respiratory tract infection, which mainly causes bronchiolitis and pneumonia. Infant RSV infection is closely related to the occurrence and development of juvenile allergic asthma. Environment and genetic factors may be related to this phenomenon, but the specific reasons are unclear. Cellular immunity plays an important role in the clearance and pathogenesis of RSV infection. Among them, CD8 T lymphocytes are the main effector cells. CD8 T cells recognize and kill host cells by interacting with MHC I molecules. After the host cells infected with RSV, the expression of MHCI increased significantly, which enhanced the immune response mediated by CD8 T cells. In this paper, we studied the regulation of NLRC5 expression in respiratory syncytial virus infection and its significance. NLRC5 is a natural immune recognition receptor NLRs family. A newly discovered protein. In order to detect the expression of NLRC5 in the process of RSV infection, we first prepared the polyclonal antibody and monoclonal antibody of NLRC5. We selected the protein fragment containing 258 amino acid residues at the C-terminal of NLRC5 as antigen and then prepared the corresponding recombinant protein in Escherichia coli expression system to immunize New Zealand rabbits and mice respectively. Polyclonal antibodies and monoclonal antibodies were prepared respectively. The specificity of monoclonal antibodies was screened by ELISA. The immunoblotting assay showed that the antibody had the ability to specifically recognize human NLRC5. We used these reagents to regulate the expression of NLRC5 and MHCI molecules in the process of RSV infection. Research. It was found that RSV infection induces the expression of NLRC5 and MHC in the process of NLRC5 infection by inducing interferon release and viral double-stranded RNA. I-Up relationship: two ways to verify the relationship: 1). Exogenous overexpression of NLRC5 could significantly promote the expression of MHC I. 2inhibition of NLRC5 expression by siRNA can significantly reduce the expression of MHC I in the process of RSV infection. In conclusion, it is the first time that RSV infection can significantly induce NLRC5 expression. The important role of NLRC5 in regulating the expression of MHC I in the process of RSV infection was discussed, which may be the potential cause of RSV induced immunopathologic injury and asthma.
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R373

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