本文關(guān)鍵詞：Chinese1基因型弓形蟲棒狀體蛋白ROP16的基因克隆表達及生物信息學分析　出處：《安徽醫(yī)藥》2015年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的構(gòu)建弓形蟲Chinese 1基因型Tg Ct Wh3(以后均簡稱Wh3)株棒狀體蛋白(rhoptry protein,ROPs)16的原核和真核重組表達質(zhì)粒及其3D結(jié)構(gòu)。方法參照ROP16序列分別設(shè)計引物,采用PCR從弓形蟲Chinese 1基因型Wh3株基因組DNA中擴增出編碼ROP16的基因片段,克隆至p MD18-T載體;經(jīng)PCR及測序分析鑒定;陽性克隆的質(zhì)粒分別亞克隆至原核表達載體p ET-28a和真核表達載體p EGFP-C2,分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21和DH5α,PCR和酶切鑒定轉(zhuǎn)化菌落插入的序列;將構(gòu)建的原核表達菌株經(jīng)IPTG誘導,SDS-PAGE和免疫印跡分析融合蛋白的表達;將構(gòu)建的真核重組質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染293T細胞,觀察其在細胞中表達;采用生物信息學方法分析構(gòu)建了蛋白的3D結(jié)構(gòu)。結(jié)果各組均PCR擴增出約2.1 kb ROP16基因的特異片段,序列檢測結(jié)果均正確;分別亞克隆到原核表達載體p ET-28a和真核表達載體p EGFP-C2中,成功構(gòu)建了Chinese 1基因型弓形蟲棒狀體蛋白ROP16的原核表達質(zhì)粒和真核表達質(zhì)粒;原核表達質(zhì)粒在大腸桿菌中表達了ROP16的融合蛋白;真核表達質(zhì)粒在293T細胞中成功表達,成功構(gòu)建出ROP16基因的3D結(jié)構(gòu)圖。結(jié)論以p ET-28a和p EGFP-C2為載體,分別成功構(gòu)建并表達了ROP16的原核和真核重組質(zhì)粒,并構(gòu)建出其3D結(jié)構(gòu)圖。
[Abstract]:Objective to construct the rhoptry protein of Toxoplasma gondii Chinese 1 genotype TG Ct Wh3. The prokaryotic and eukaryotic expression plasmids of ROPs)16 and their 3D structures were designed respectively according to the ROP16 sequence. The gene encoding ROP16 was amplified by PCR from genomic DNA of Toxoplasma gondii Chinese 1 genotype Wh3 strain and cloned into p MD18-T vector. It was identified by PCR and sequencing. The positive clones were subcloned into prokaryotic expression vector p ET-28a and eukaryotic expression vector pEGFP-C2, respectively, and transformed into Escherichia coli BL21 and DH5 偽, respectively. PCR and enzyme digestion were used to identify the inserted sequence of transformed colonies. The recombinant prokaryotic expression strain was induced by IPTG and SDS-PAGE and Western blot were used to analyze the expression of fusion protein. The constructed eukaryotic recombinant plasmid was transfected into 293T cells by liposome and its expression was observed. Results the specific fragment of 2. 1 kb ROP16 gene was amplified by PCR in each group, and the results were correct. Subcloned into prokaryotic expression vector p ET-28a and eukaryotic expression vector p EGFP-C2, respectively. The prokaryotic expression plasmids and eukaryotic expression plasmids of Chinese 1 genotype Toxoplasma gondii corydbody protein ROP16 were successfully constructed. The prokaryotic expression plasmid expressed the fusion protein of ROP16 in Escherichia coli. The eukaryotic expression plasmid was successfully expressed in 293T cells and the 3D structure of ROP16 gene was successfully constructed. Conclusion the vector p ET-28a and p EGFP-C2 are used as vectors. The prokaryotic and eukaryotic recombinant plasmids of ROP16 were constructed and expressed successfully, and the 3D structure of the recombinant plasmids were constructed.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院病原與免疫學實驗室;安徽省六安市人民醫(yī)院檢驗科;安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院檢驗科;安徽醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院衛(wèi)生檢驗檢疫系;安徽醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院寄生蟲學教研室;
【基金】：國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(973計劃)(No2010CB530001) 國家青年科學基金(No 81101272)
【分類號】：R382.5;R3416
【正文快照】： (1.安徽醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院病原與免疫學實驗室,安徽合肥230032;2.安徽省六安市人民醫(yī)院檢驗科,安徽六安237000;3.安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院檢驗科,安徽合肥230022;4.安徽醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院衛(wèi)生檢驗檢疫系,安徽合肥230032;5.安徽醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院寄生蟲學教研室,安徽合肥

【參考文獻】

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本文編號：1413558