本文關鍵詞：DC-SIGN表達調控與抗結核免疫應答關系的實驗研究　出處：《重慶醫(yī)科大學》2009年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 目的:篩選合適的實驗對象,研究IL-4調控樹突狀細胞特異性細胞間黏附分子3結合非整合素(dendritic cell-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin, DC-SIGN)的表達對樹突狀細胞免疫學功能的影響,進而探討DC-SIGN表達水平與結核病發(fā)生的關系。 方法:①密度梯度離心法獲得C57BL/6小鼠骨髓、脾臟和人外周血單個核細胞,貼壁法去除懸浮細胞,貼壁細胞中加入粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)和白細胞介素-4(IL-4)協同誘導其分化為樹突狀細胞。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài),流式細胞儀檢測細胞表面CD11c、DC-SIGN、CD80、CD83、CD86和MHC-Ⅱ(或HLA-DR)分子的表達。②用不同劑量的IL-4(5、10、50、100、200 ng/ml)調控人外周血來源的DCs表面DC-SIGN的表達水平,流式細胞儀檢測各組DCs表型。③根據加入IL-4劑量將人外周血來源的DCs分為IL-4(5 ng/ml)組和IL-4(50 ng/ml)組,分別加入脂多糖(LPS)、結核桿菌H37Rv菌懸液共培養(yǎng)。應用流式細胞儀檢測各組DCs表型(CD11c、DC-SIGN、CD83、CD86、HLA-DR),ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中IL-12、IL-10含量,混合淋巴細胞培養(yǎng)法檢測各組DCs刺激同種異體T淋巴細胞增殖的能力。 結果:①小鼠骨髓、脾臟及人外周血來源的DCs培養(yǎng)7天后具有DCs的典型形態(tài)學特征。②小鼠骨髓、脾臟來源的DCs培養(yǎng)1天、3天、7天后,DC-SIGN表達水平均 2%。人外周血來源的DCs培養(yǎng)1天、3天、7天后DC-SIGN表達水平分別為:52.86%、87.70%、83.37%。③小鼠骨髓來源的DCs培養(yǎng)7天后細胞表面CD11c、CD80、CD86和MHC-Ⅱ表達水平分別為:5.42%、2.95%、29.19%、52.59%。小鼠脾臟來源的DCs培養(yǎng)7天后細胞表面CD11c、CD80、CD86和MHC-Ⅱ分子表達水平分別為:4.01%、1.19%、16.16%、54.89%。人外周血來源的DCs培養(yǎng)7天后細胞表面CD11c、CD83、CD86和HLA-DR表達水平分別為:93.62%、90.06%、97.54%、99.65%。④當加入IL-4的劑量由5 ng/ml增加到50 ng/ml時,DC-SIGN的表達水平顯著增加(P 0.05)。但當IL-4的劑量由50 ng/ml增至200 ng/ml時,DC-SIGN的表達水平雖仍隨IL-4劑量增加而增加,但差異無統(tǒng)計學意義(P 0.05)。⑤表達不同水平DC-SIGN的DCs成熟度無顯著差異(P 0.05)。⑥表達不同水平DC-SIGN的DCs加入LPS、H_(37)Rv誘導后,培養(yǎng)液中IL-12含量無顯著差異(P 0.05),加入LPS誘導后培養(yǎng)液中IL-10含量也無顯著差異(P 0.05),但DC-SIGN~(high)-DCs加入H37Rv誘導后培養(yǎng)液中IL-10含量明顯高于DC-SIGN~(low)-DCs(P 0.05)。⑦表達不同水平DC-SIGN的DCs加入LPS誘導后刺激同種異體T淋巴細胞增殖的能力差異無統(tǒng)計學意義(P 0.05)。DC-SIGNhigh-DCs加入H37Rv誘導成熟后與表達不同水平DC-SIGN的DCs加入LPS誘導成熟后刺激同種異體T淋巴細胞增殖的能力相當(P 0.05),但DC-SIGN~(low)-DCs加入H37Rv誘導后刺激同種異體T淋巴細胞增殖能力明顯低于其它3組(P 0.05)。 結論:①小鼠骨髓和脾臟來源的DCs體外培養(yǎng)后細胞表面DC-SIGN及共刺激分子表達水平低,且細胞純度低,無法進行后續(xù)實驗,C57BL/6小鼠不適合用于建立研究DC-SIGN的動物模型。人外周血來源的DCs體外培養(yǎng)后細胞表面DC-SIGN及共刺激分子表達水平高,且細胞純度高,適合進行后續(xù)實驗。②IL-4能調控DC-SIGN的表達水平,并呈劑量依賴性。③DC-SIGN~(high)-DCs加入H37Rv誘導后分泌IL-10水平明顯高于DC-SIGN~(low)-DCs,但DC-SIGN~(low)-DCs加入H_(37)Rv誘導后刺激T淋巴細胞增殖的能力明顯降低。DC-SIGN表達水平過高或過低均不利于機體抗結核免疫應答。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of IL - 4 on the immunological function of dendritic cells in vitro and to explore the relationship between DC - SIGN expression level and tuberculosis . Methods : 鈶，

本文編號：1397749