本文關(guān)鍵詞：羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫學(xué)特性研究　出處：《昆明醫(yī)學(xué)院》2009年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的:從羊膜中分離、培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs),分析其免疫原性及對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響,以期為尋找更易獲得且易于培養(yǎng)和純化的MSCs新來(lái)源及臨床提高造血干細(xì)胞移植(HSCT)成功率、減少移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:采用組織塊培養(yǎng)法從羊膜中分離、培養(yǎng)MSCs;用流式細(xì)胞術(shù)分析羊膜MSCs表面的HLA-A,B,C、HLA-DR以及T淋巴細(xì)胞活化所需共刺激分子CD80、CD86、CD40的表達(dá);用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)羊膜MSCs刺激同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的能力;應(yīng)用CCK-8法觀察羊膜MSCs對(duì)成人外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響。 結(jié)果:羊膜MSCs具有低免疫原性,其細(xì)胞表面只表達(dá)低水平的HLA-A,B,C,不表達(dá)HLA-DR以及CD80、CD86、CD40,不會(huì)引起同種異體T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng),能夠抑制成人外周血淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,且這種抑制作用具有劑量依賴性。當(dāng)羊膜MSCs與淋巴細(xì)胞的比例為1:10和1:50時(shí)均未能刺激同種異體T淋巴細(xì)胞增殖。當(dāng)羊膜MSCs與淋巴細(xì)胞的比例為1:1時(shí)對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的平均抑制率為88.92%;當(dāng)羊膜MSCs與淋巴細(xì)胞的比例為1:2時(shí)對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的平均抑制率為83.38%:當(dāng)羊膜MSCs與淋巴細(xì)胞的比例為1:4時(shí)對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的平均抑制率為62.10%;當(dāng)羊膜MSCs與淋巴細(xì)胞的比例為1:8時(shí)對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的平均抑制率為32.22%;當(dāng)羊膜MSCs與淋巴細(xì)胞的比例為1:16時(shí)對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的平均抑制率為17.35%。 結(jié)論:從羊膜中可以成功分離、培養(yǎng)出MSCs,利用其低免疫原性及對(duì)淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用,有望在誘導(dǎo)免疫耐受、減少和預(yù)防GVHD中發(fā)揮重要作用,提高HSCT的成功率,減少GVHD的發(fā)生。
[Abstract]:Objective: to isolate from the amniotic membrane in cultured mesenchymal stem cells (MSCs), analysis of the impact of its immunogenicity and on lymphocyte transformation, in order to find a more accessible and easy to MSCs new source and clinical training and purification of improving hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) success rate, reduce graft-versus-host disease (GVHD) to provide experimental basis.
Methods: using tissue separation, from amnion cultured MSCs; flow cytometry analysis of amniotic membrane surface of MSCs HLA-A, B, C, HLA-DR and T lymphocyte activation required costimulatory molecules CD80, CD86, CD40 expression ability; Needling proliferation of allogeneic T lymphocytes induced by MSCs detection of amniotic membrane mixed lymphocyte reaction the effects of MSCs on amniotic membrane; adult peripheral blood lymphocyte transformation by CCK-8 method.
Results: MSCs amniotic membrane has low immunogenicity, the cell surface expressed only low levels of HLA-A, B, C, HLA-DR and CD80 expression, CD86, CD40, will not cause the proliferation of allogeneic T lymphocytes, can inhibit the conversion of adult peripheral blood lymphocytes, and this inhibition is dose dependent. When the amniotic membrane MSCs and lymphocyte ratio of 1:10 and 1:50 were unable to stimulate allogeneic T lymphocyte proliferation. When the amniotic membrane MSCs and lymphocyte ratio average inhibition 1:1 on lymphocyte transformation rate was 88.92%; when the amniotic membrane MSCs and lymph cell ratio was 1:2 on average inhibition of lymphocyte transformation rate was 83.38% when: MSCs and lymphocyte ratio of amniotic membrane average inhibition 1:4 on lymphocyte transformation rate was 62.10%; when the amniotic membrane MSCs and lymphocyte ratio was 1:8 on average inhibition of lymphocyte transformation rate was 32.22%; When the proportion of MSCs and lymphocyte in amniotic membrane was 1:16, the average inhibition rate of lymphocyte transformation was 17.35%.
Conclusion: MSCs can be successfully isolated from amniotic membrane and cultured, and its low immunogenicity and immunomodulatory effect on lymphocytes are expected to play an important role in inducing immune tolerance, reducing and preventing GVHD, improving the success rate of HSCT and reducing the occurrence of GVHD.

【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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