本文關(guān)鍵詞：兔AMSCs與BMSCs成骨分化比較及OGP對(duì)AMSCs成骨分化干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《昆明醫(yī)學(xué)院》2009年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】： 第一部分兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究 【目的】分離兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,比較兩種細(xì)胞的體外增殖及成骨分化能力,為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞替代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞做為骨組織工程種子細(xì)胞提供依據(jù)。 【方法】無(wú)菌條件下切取兔雙側(cè)腹股溝脂肪墊和抽取髂骨骨髓,利用細(xì)胞貼壁性對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行分離,比較兩種細(xì)胞的情況,包括(1)細(xì)胞形態(tài)、(2)細(xì)胞貼壁率、(3)細(xì)胞生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)、(4)細(xì)胞表面標(biāo)記、(5)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Von kossa染色鑒定向成骨方向分化的能力(6)堿性磷酸酶及游離鈣含量定量測(cè)定。并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 【結(jié)果】(1)兩種細(xì)胞形態(tài)均為條索樣,呈成纖維細(xì)胞樣形態(tài)。(2)對(duì)兩種細(xì)胞貼壁率進(jìn)行重復(fù)測(cè)量方差分析,F=2.905,P＞0.05,無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,即可以認(rèn)為不同時(shí)間點(diǎn)兩種細(xì)胞貼壁率相似。(3)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖能力與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相當(dāng),消化后的第2、5代細(xì)胞經(jīng)歷24-48小時(shí)的潛伏期后,進(jìn)入6-9天的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,然后過(guò)渡到平臺(tái)期。(4)通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表面均陽(yáng)性表達(dá)CD44。(5)兩種細(xì)胞堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、Von kossa染色均為陽(yáng)性。(6)兩種細(xì)胞成骨誘導(dǎo)后堿性磷酸酶定量測(cè)定,對(duì)于兩組不同來(lái)源的細(xì)胞誘導(dǎo)后的ALP值進(jìn)行重復(fù)測(cè)量方差分析,F=3.067,P＞0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,即可認(rèn)為不同時(shí)間點(diǎn)兩種細(xì)胞ALP值相當(dāng)。(7)游離鈣含量測(cè)定,對(duì)于兩組不同來(lái)源的細(xì)胞誘導(dǎo)后的鈣含量進(jìn)行重復(fù)測(cè)量方差分析,F=7.564,P＞0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,即可認(rèn)為不同時(shí)間點(diǎn)兩種細(xì)胞ALP值相當(dāng)。 【結(jié)論】(1)自兔脂肪中可提取出與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性類(lèi)似的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。(2)相同條件下脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨能力無(wú)顯著性差異。(3)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞可以作為骨組織工程種子細(xì)胞。 第二部分OGP對(duì)兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞增殖與成骨分化干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究 【目的】觀察成骨生長(zhǎng)肽(OGP)對(duì)兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響。 【方法】貼壁法分離獲得兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,通過(guò)換液和傳代純化細(xì)胞。用傳二代細(xì)胞做MTT試驗(yàn),以此確定OGP對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞增殖作用的最佳活性濃度。將傳3代脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞以10~5/孔的密度接種于6孔板中,以確定促進(jìn)AMSCs成骨分化最佳OGP活性濃度。以及最佳活性濃度OGP、10~(-8)mol/L地塞米松及二者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)AMSCs成骨分化比較。 【結(jié)果】當(dāng)OGP濃度處于一定范圍內(nèi)(10~(-11)-10~(-7)mol/L)時(shí)能明顯促進(jìn)兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖活性,其最佳作用濃度為10~(-11)mol/L。不同濃度OGP對(duì)AMSCs成骨分化與對(duì)照組相比均具有明顯促進(jìn)作用(P＜0.05),且最佳濃度為10~(-9)mol/L(P＜0.05)。10~(-9)mol/LOGP與10~(-8)mol/L地塞米松具有相當(dāng)?shù)某晒切?yīng)(P＞0.05)。10~(-9)mol/LOGP與10~(-8)mol/L地塞米松聯(lián)合應(yīng)用具有正協(xié)同效應(yīng),高于其他組效應(yīng)(P＜0.05)。 【結(jié)論】在兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)中,OGP對(duì)脂肪干細(xì)胞的增殖及成骨分化有明顯促進(jìn)作用,說(shuō)明OGP在骨組織工程中有廣闊的應(yīng)用前景。
[Abstract]:Comparative Experimental Study on the Proliferation of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells and Rabbit Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells and Osteogenic Differentiation of Rabbit Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Objective To isolate the rabbit bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) and adipose - derived mesenchymal stem cells ( MSCs ) , compare the in vitro proliferation and osteogenic differentiation ability of the two kinds of cells , and provide the basis for the replacement of bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) as the seed cells of bone tissue engineering . Methods The bone marrow of rabbit ' s bilateral inguinal fat pad was cut off under aseptic conditions . The cells were isolated by cell adhesion , including ( 1 ) cell morphology , ( 2 ) cell adherent rate , ( 3 ) cell growth kinetics , ( 4 ) cell surface marker , ( 5 ) alkaline phosphatase ( ALP ) and Von kossa staining . ( 4 ) The ALP values of the two groups were similar . ( 4 ) The ALP values of the two groups were similar . ( 4 ) The ALP values of the bone marrow mesenchymal stem cells and the adipose - mesenchymal stem cells were measured after 24 - 48 hours . Conclusion : ( 1 ) There is no significant difference between fat - derived mesenchymal stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells from rabbit fat . ( 3 ) Adipose mesenchymal stem cells can be used as seed cells of bone tissue engineering . Effect of the second part of OGP on the proliferation and osteogenic differentiation of rabbit adipose - derived mesenchymal stem cells Objective To observe the effect of bone growth peptide ( OGP ) on the proliferation and osteogenic differentiation of rabbit fat mesenchymal stem cells . The optimal concentration of OGP on the proliferation of adipose - derived mesenchymal stem cells was determined by MTT assay . RESULTS : When OGP concentration was within a certain range ( 10 ~ ( -11 ) -10 ~ ( -7 ) mol / L ) , the optimal concentration of OGP was 10 ~ ( -11 ) mol / L . The optimal concentration was 10 ~ ( -9 ) mol / L ( P < 0 . 05 ) . 10 ~ ( -9 ) mol / LOGP and 10 ~ ( -8 ) mol / L dexamethasone have positive synergistic effect , which is higher than that of other group ( P < 0.05 ) . Conclusion : In vitro culture of rabbit adipose - derived mesenchymal stem cells , OGP can promote the proliferation and osteogenic differentiation of adipose - derived stem cells , suggesting that OGP has a wide application prospect in bone tissue engineering .

【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1364803