本文關鍵詞：大鼠原代肝星狀細胞活化后組蛋白修飾水平的觀察　出處：《中國病理生理雜志》2015年05期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的:觀察體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細胞(HSCs)活化過程中組蛋白修飾的改變以及與HSCs活化指標α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的關系,探討組蛋白修飾在HSCs活化過程中可能的作用。方法:體外分離、鑒定、培養(yǎng)大鼠HSCs,光鏡觀察HSCs活化過程中的形態(tài)變化,細胞免疫熒光染色和Western blotting檢測desmin和α-SMA的表達,比較靜止型HSCs和激活型HSCs中H4K12乙酰化、H3K9乙�；�、H3K4二甲基化和H3K9二甲基化的變化。結果:(1)細胞形態(tài)學觀察結果表明HSCs在培養(yǎng)過程中形態(tài)由靜息狀態(tài)向高度分化的肌成纖維細胞轉化。細胞免疫熒光染色及Western blotting檢測結果顯示,分離培養(yǎng)24 h的HSCs有desmin表達,但幾乎不表達α-SMA;隨著培養(yǎng)時間延長,HSCs內α-SMA和desmin表達逐步增加,至15 d時達到最大。(2)根據(jù)HSCs細胞形態(tài)變化及HSCs活化標志蛋白檢測結果,確定培養(yǎng)24 h的HSCs為靜止型HSCs,培養(yǎng)15 d的HSCs為激活型HSCs,分別檢測其組蛋白修飾變化。結果顯示,與靜止型HSCs比較,激活型HSCs中H4K12乙�；�、H3K9乙酰化和H3K9二甲基化修飾水平明顯降低(P0.01),而H3K4二甲基化修飾水平明顯增加(P0.01),且H3K4二甲基化修飾水平變化與α-SMA表達變化一致。結論:在體外培養(yǎng)HSCs活化過程中,組蛋白修飾發(fā)生明顯異常,提示組蛋白修飾改變有可能參與了HSCs活化以及肝纖維化的發(fā)生。
[Abstract]:Objective: to observe the changes of histone modification during the activation of rat hepatic stellate cells (HSCs) in vitro and the relationship between histone modification and 偽 -SMA-activated index of HSCs. Objective: to investigate the possible role of histone modification in the activation of HSCs. Methods: HSCs were isolated, identified and cultured in vitro. Morphological changes in the process of HSCs activation were observed under light microscope. The expression of desmin and 偽 -SMA was detected by cell immunofluorescence staining and Western blotting, and the acetylation of H4K12 was compared between resting HSCs and activated HSCs. H3K9 acetylation. Changes in H3K4 dimethylation and H3K9 dimethylation. The morphological changes of HSCs from resting state to highly differentiated myofibroblast were observed. Cellular immunofluorescence staining and Western. The results of blotting test showed that. The HSCs isolated for 24 h showed desmin expression, but almost no 偽 -SMA expression. The expression of 偽 -SMA and desmin in HSCs increased gradually with the increase of culture time. According to the morphologic changes of HSCs cells and the detection results of HSCs activation marker protein, the HSCs cultured for 24 h was confirmed as stationary HSCs. The histone modification of HSCs was detected after 15 days of culture. The results showed that the acetylation of H4K12 in activated HSCs was higher than that in static HSCs. The level of H3K9 acetylation and H3K9 dimethylation decreased significantly, while H3K4 dimethylation level increased significantly (P0.01). The change of H3K4 dimethylation level is consistent with the change of 偽 -SMA expression. Conclusion: histone modification is abnormal during HSCs activation in vitro. These results suggest that histone modification may be involved in the activation of HSCs and hepatic fibrosis.
【作者單位】： 貴陽醫(yī)學院病理生理學教研室;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.81160064) 貴州省科技廳聯(lián)合基金[黔科合LG字(2012)023號]
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 近年來研究表明,肝星狀細胞(hepatic stellatecells,HSCs)的激活是肝纖維化形成的中心環(huán)節(jié),HSCs自分泌的多種細胞因子作用于HSCs表面的受體,通過細胞內信號轉導,不斷刺激HSCs自身分裂增殖,并大量合成和分泌膠原等細胞外基質(extra-cellular matrix,ECM)在肝內沉積,最終導致肝

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1361155