本文關(guān)鍵詞：雌激素快速信號(hào)通路介導(dǎo)的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制的研究　出處：《華北煤炭醫(yī)學(xué)院》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 全腦缺血 雌激素膜受體 EDC E2-BSA AKT ERK JNK

【摘要】：目的:制作大鼠四血管結(jié)扎全腦缺血模型(global cerebral ischemia, GCI),使用結(jié)合雌激素EDC(estrogen-dendrimer conjugates)和E2-BSA,研究雌激素膜受體(membrane estrogen receptor,mER)介導(dǎo)的快速信號(hào)通路對(duì)缺血性神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)作用及其對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響,并探討其可能的分子機(jī)制。 方法:1)SPF級(jí)成年雌性SD大鼠(250 g),行雙側(cè)卵巢切除術(shù),一周后制作四動(dòng)脈結(jié)扎全腦缺血模型,缺血10 min。2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:動(dòng)物隨機(jī)分為sham組、缺血再灌注組、EDC或E2-BSA組、抑制劑組(ICI 182780、LY294002、PD98059)和溶劑對(duì)照組。缺血前1 h腦室注射EDC和E2-BSA,抑制劑或溶劑在給予EDC或E2-BSA前10 min腦室注射。3)激光共聚焦顯微鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的損傷和存活情況。4)Morris水迷宮檢測(cè)大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶功能的變化。5)Western blot、激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)AKT等激酶磷酸化和蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果1.腦室注射FITC-EDC和FITC-E2-BSA 1 h后,激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)EDC和E2-BSA主要定位于海馬CA1區(qū)神經(jīng)元胞膜上。 2. EDC和E2-BSA具有神經(jīng)保護(hù)作用。缺血10 min再灌注7 d,與Sham組相比,溶劑對(duì)照組大鼠海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元顯著減少,而EDC和E2-BSA組大鼠海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元與sham組相比沒(méi)有顯著差異,但明顯多于溶劑對(duì)照組,約為溶劑對(duì)照組的4倍;給予雌激素抑制劑ICI180,782后,ICI + EDC和ICI + E2-BSA組存活神經(jīng)元數(shù)量較sham組顯著減少,與溶劑對(duì)照組沒(méi)有顯著差別。 3. EDC和E2-BSA能明顯改善缺血后大鼠的學(xué)習(xí)記憶及空間探索功能。Morris水迷宮試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),缺血10 min再灌注7-9 d后,與sham組相比,溶劑對(duì)照組大鼠尋找安全平臺(tái)的潛伏期明顯延長(zhǎng),而EDC組大鼠尋找安全平臺(tái)的潛伏期較溶劑對(duì)照組顯著降低;移走安全平臺(tái)后,與sham組相比,90 s內(nèi)溶劑對(duì)照組大鼠于平臺(tái)所在象限停留時(shí)間明顯縮短,而EDC組大鼠在此象限停留時(shí)間較溶劑對(duì)照組顯著延長(zhǎng)。 4. EDC和E2-BSA能快速誘導(dǎo)促生存激酶AKT磷酸化水平升高。與sham組相比,再灌注10 min時(shí)間點(diǎn)p-AKT水平開(kāi)始升高,3 h達(dá)到高峰,6 h開(kāi)始下降,持續(xù)至1 d降至與Sham相同水平。給予EDC和E2-BSA治療后,與缺血再灌注組(I/R)相比,10min-3h時(shí)間點(diǎn),p-AKT水平明顯升高,AKT和β-actin水平在所有時(shí)間點(diǎn)均未發(fā)生改變,說(shuō)明所有樣品中蛋白的含量相等。 5. EDC和E2-BSA快速誘導(dǎo)促生存激酶ERK1/2磷酸化水平升高。與sham相比,缺血再灌注誘導(dǎo)p- ERK1/2水平雙相升高。第一個(gè)高峰出現(xiàn)在再灌注10 min時(shí)間點(diǎn),持續(xù)至3 h;第二個(gè)高峰出現(xiàn)在再灌注1d。給予EDC和E2-BSA后,再灌注10 min-6 h p- ERK1/2明顯高于I/R組,以10 min最為顯著。總的ERK1/2和β-actin水平在所有時(shí)間點(diǎn)均未發(fā)生改變。 6. EDC和E2-BSA抑制促凋亡激酶p-JNK表達(dá)。與sham組相比,I/R各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(3 h除外)的p-JNK水平均增高,而EDC組p-JNK水平較I/R組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)顯著降低(3 h除外)。JNK的總蛋白水平?jīng)]有顯著變化。 7.阻斷AKT和ERK1/2通路能消除EDC和E2-BSA的神經(jīng)保護(hù)作用。研究結(jié)果顯示,腦室注射EDC和E2-BSA前10 min給予PI3K抑制劑LY294002,消除AKT早期快速磷酸化水平的升高,雌激素的神經(jīng)保護(hù)作用消失。MEK抑制劑PD98059可顯著降低EDC介導(dǎo)的p-ERK1/2的早期快速升高,同樣能夠消除雌激素的神經(jīng)保護(hù)作用。另外,給予雌激素受體拮抗劑ICI182780,AKT和ERK早期快速磷酸化激活峰消失,但是p-JNK水平升高,說(shuō)明EDC和E2-BSA通過(guò)雌激素膜受體途徑誘導(dǎo)AKT和ERK1/2磷酸化水平升高,同時(shí)抑制JNK磷酸化激活,從而起到神經(jīng)保護(hù)作用。 8. EDC和E2-BSA快速誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子CREB磷酸化水平升高,繼而上調(diào)BDNF蛋白表達(dá)。與I/R組相比,EDC和E2-BSA能夠于再灌注10min內(nèi)快速誘導(dǎo)CREB磷酸化水平升高,并且在3 h、6 h、1 d時(shí)間點(diǎn)使p-CREB保持在較高的水平。與I/R組相比,EDC和E2-BSA組BDNF蛋白水平于再灌注6 h開(kāi)始升高,維持至1 d持續(xù)升高。給予PI3K抑制劑LY294002和MEK抑制劑PD98059均能夠顯著減弱10 min時(shí)間點(diǎn)EDC和E2-BSA誘導(dǎo)的p-CREB水平升高,但是對(duì)于BDNF蛋白表達(dá)沒(méi)有影響,而再灌注6 h時(shí)間點(diǎn),EDC和E2-BSA誘導(dǎo)p-CREB水平和BDNF蛋白表達(dá)升高均被抑制。 結(jié)論EDC和E2-BSA通過(guò)與海馬神經(jīng)元胞膜上的雌激素膜受體結(jié)合,快速誘導(dǎo)AKT/ERK1/2-CREB-BDNF促生存信號(hào)通路,抑制JNK促凋亡信號(hào)通路,發(fā)揮抗缺血性神經(jīng)元損傷作用,并明顯改善大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶功能。
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【學(xué)位授予單位】：華北煤炭醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;Neuroprotection of selenite against ischemic brain injury through negatively regulating early activation of ASK1/JNK cascade via activation of PI3K/AKT pathway[J];Acta Pharmacologica Sinica;2007年01期

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本文編號(hào)：1354064