本文關(guān)鍵詞：AT受體在血管緊張素Ⅱ引起的內(nèi)皮祖細(xì)胞凋亡中的作用　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的：1、研究從人臍靜脈血中分離出單個(gè)核細(xì)胞后,加入VEGF、b-FGF后誘導(dǎo)分化成內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells, EPCs)的原代培養(yǎng)方法及EPCs的鑒定方法；2、觀(guān)察加入高濃度血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)的條件下,EPCs是否發(fā)生凋亡及不同濃度,同一濃度不同時(shí)間段下對(duì)其凋亡率的影響；3、觀(guān)察在高濃度的AngⅡ引起的EPCs凋亡中,AT受體所起的作用。 方法：無(wú)菌條件下采集人臍靜脈血,采用6%羥乙基淀粉沉降法和密度梯度離心法,兩種方法聯(lián)合從臍帶血中分離出單個(gè)核細(xì)胞,接種于加有生長(zhǎng)因子(VEGF及b-FGF)的M199培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)7天后,就從以下幾點(diǎn)鑒定EPCs:1、倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)。2、多重免疫熒光法處理細(xì)胞后,在激光共聚焦顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞吞噬FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL的能力。3、經(jīng)免疫組化法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色后,觀(guān)察CD34和CD133的顯色情況。 鑒定EPCs成功后,收集第7天的貼壁細(xì)胞,按以下幾種情況分組：1、加入不同濃度的AngⅡ(10-4mol/L, 10-6mol/L, 10-8mol/L),干預(yù)24h。2、在一定濃度(10-6mol/L)下干預(yù)不同時(shí)間(12h,24h,48h)。3、加入AT受體拮抗劑干預(yù)12h后,再加入10-6mol/L濃度的AngⅡ干預(yù)24h,,最后分別用流式細(xì)胞儀Pl單染法檢測(cè)各組EPCs的凋亡率。 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：每組細(xì)胞設(shè)3個(gè)復(fù)孔。所有的數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,統(tǒng)計(jì)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)注差(x±S)表示,多組間比較采用方差分析,組內(nèi)比較采用LSD-t檢驗(yàn),檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為α=0.05 結(jié)果：1、從人臍靜脈血中可以分離出單個(gè)核細(xì)胞后,經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)生成EPCs。2、高濃度的Angll可以促使EPCs凋亡,且當(dāng)Angll濃度達(dá)到10-6mol/L時(shí),EPCs凋亡率呈劑量和時(shí)間依賴(lài)性；3、當(dāng)用AngⅡ受體拮抗劑(AT1受體阻滯劑氯沙坦、AT2受體受體阻滯劑PD123319)干預(yù)12h后,再加入濃度為10-6mol/L的AngⅡ干預(yù)24h,我們可以發(fā)現(xiàn)：?jiǎn)斡肁T1受體阻滯劑可以減少AngⅡ引起的對(duì)EPCs的凋亡,但其抑制作用較小,與AngⅡ組相比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。單用AT2受體阻滯劑PD123319對(duì)AngⅡ引起的EPCs凋亡率有抑制作用,與AngⅡ組相比,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。但兩者合用時(shí),較單獨(dú)使用任一阻滯劑,對(duì)EPCs凋亡率的抑制作用明顯,與AngⅡ組相比差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論： 1、VEGF、bFGF可以誘導(dǎo)臍靜脈血中單個(gè)核細(xì)胞分化為EPCs。 2、高濃度AngⅡ可引起EPCs凋亡,并且有時(shí)間劑量依賴(lài)性。 3、氯沙坦對(duì)AngⅡ介導(dǎo)的EPCs凋亡影響較小,PD123319則可部分抑制AngⅡ誘導(dǎo)的凋亡；合用時(shí),抑制凋亡作用明顯
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R363

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