本文關鍵詞：人類LNX調節(jié)信號傳導和細胞周期的分子機制研究　出處：《復旦大學》2009年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：LNX蛋白(Ligand of Numb-protein X)是最初作為發(fā)育過程中細胞命運決定因子Numb的相互作用蛋白而被分離出來。隨后研究證實,LNX蛋白包括如下結構：N端的環(huán)指結構域(RING finger domain), LDNPAY基序,和C端的4個PDZ結構域。它能作為RING finger類型的泛素連接酶,導致Numb蛋白的泛素化和降解。LNX蛋白是第一個被發(fā)現的含有PDZ結構域的RING finger家族E3泛素連接酶成員。近年來的研究證實,LNX蛋白不僅參與信號傳導(比如Notch信號通路),而且在腫瘤發(fā)生中扮演重要作用。但LNX發(fā)揮作用的分子機制仍未完全闡明。 LNX包含4個PDZ結構域,這使得它在協調不同細胞信號組件方面發(fā)揮重要作用。之前已通過酵母雙雜交實驗篩選可能與LNX相互作用的蛋白質,其中一個候選蛋白就是RhoC。RhoC蛋白是Ras家族成員之一,它促進肌動蛋白細胞骨架的重新組織,調節(jié)細胞形態(tài)、附著和運動。我們通過免疫共沉淀實驗結果證實LNX能與RhoC相互作用,也證實LNX的第一個PDZ結構域對于LNX和RhoC的結合是不可缺少的。熒光共定位實驗顯示,當與LNX共轉染時,RhoC蛋白改變其細胞亞定位,從全細胞定位改變?yōu)榧毎硕ㄎ�。此�?我們還發(fā)現過表達LNX對AP-1轉錄活性有上調作用,而當LNX和RhoC共轉染時,AP-1轉錄活性受到抑制。我們推測LNX和RhoC是大型的蛋白復合物的組成部分,調節(jié)AP-1轉錄活性,也在信號傳導過程中發(fā)揮重要作用。 我們應用流式細胞儀檢測發(fā)現siRNA介導的LNX基因表達抑制可以導致細胞周期阻滯于G0/G1期。為了進一步解析LNX基因沉默后導致的細胞周期停滯的分子機制,我們應用Illumina microarray技術分析了LNX表達抑制細胞和對照組細胞內全基因組mRNA表達譜的變化,并通過熒光定量PCR實驗驗證了近30條microarray實驗中的細胞周期相關的差異表達的候選基因。結合在線的數據庫中關于相關基因功能、信號通路和細胞周期機制的信息,詳細的分析了內源性LNX影響細胞周期可能的作用模式和調控網絡。 綜合所有結果,提示LNX表達下調導致的細胞周期G0/G1阻滯和LNX表達下調后導致的β-catenin、MAPK、c-Myc、NF-κB依賴性通路抑制和TGF-β、p53-依賴性通路激活有關。這項研究有助于全面的深入了解內源性LNX蛋白對細胞周期的影響和調控作用；并且為研究LNX的多效性分子生物學功能(比如：腳手架功能和泛素連接酶功能)及在腫瘤發(fā)生中的作用提供了新的思路和線索。
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【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R329

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本文編號：1349779