本文關(guān)鍵詞：MAPK信號通路在β-葡聚糖刺激巨噬細(xì)胞生成NO和TNF-α中的作用　出處：《江蘇大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： β-葡聚糖是真菌細(xì)胞壁含量最高的多糖,同時也是真菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)中最穩(wěn)定的部分,可以引發(fā)吞噬細(xì)胞的吞噬、釋放細(xì)胞因子等一系列天然免疫反應(yīng)。作為細(xì)胞壁的多糖成分,有多種生物學(xué)活性和免疫藥理學(xué)作用,已成為眾多領(lǐng)域的研究熱點。整體動物試驗研究表明,β-葡聚糖具有免疫調(diào)節(jié)作用,可以促進(jìn)動物體內(nèi)免疫功能細(xì)胞分泌各種免疫活性因子,然后通過這些因子的介導(dǎo),使整個免疫系統(tǒng)功能增強(qiáng)。 巨噬細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中具有十分重要的地位,它通過吞噬、提呈抗原、激活淋巴細(xì)胞、分泌和產(chǎn)生細(xì)胞因子、活性氧及NO等行使抗感染、抗腫瘤等生理功能,是機(jī)體免疫應(yīng)答、免疫調(diào)節(jié)中的重要環(huán)節(jié)。明確β-葡聚糖對巨噬細(xì)胞免疫功能的影響及其作用機(jī)理,對于闡明β-葡聚糖的免疫調(diào)節(jié)功能及其作用機(jī)制具有重要意義。 目前國內(nèi)關(guān)于β-葡聚糖免疫調(diào)節(jié)功能方面的研究不多,研究方法多以整體動物實驗為主,大多停留于蛋白質(zhì)水平,對于上游水平的研究非常少。本課題以小鼠單核/巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞為研究對象,運用細(xì)胞生物學(xué)技術(shù),采用中性紅比色法檢測β-葡聚糖對巨噬細(xì)胞的增殖作用。用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)技術(shù),檢測β-葡聚糖作用于巨噬細(xì)胞后對其產(chǎn)生NO和TNF-α的影響,并初步討論了MAPK通路在這一過程中的作用。用Western blot法檢測細(xì)胞內(nèi)MAPK信號通路的活化情況。 實驗結(jié)果顯示β-葡聚糖對巨噬細(xì)胞的增殖和吞噬作用均呈雙相性。低濃度β-葡聚糖對RAW264.7細(xì)胞具有促進(jìn)作用,隨著β-葡聚糖濃度的逐漸增大,A值也不斷升高,至β-葡聚糖濃度100μg/ml時達(dá)最高峰,同時可明顯提升其吞噬能力。但隨著β-葡聚糖濃度進(jìn)一步增高,A值反而下降,當(dāng)濃度為400μg/ml時幾乎完全抑制細(xì)胞的增殖作用;受β-葡聚糖刺激6小時后RAW264.7細(xì)胞開始分泌TNF-α和NO,并隨著刺激時間的增長,分泌量在不斷的增加,在24小時時達(dá)到高峰,隨著時間的推移,細(xì)胞因子的表達(dá)量也有所增加,但是增加量在逐漸減少。ERK1/2通路的抑制劑(PD98059)試驗結(jié)果顯示其可抑制受刺激RAW264.7細(xì)胞釋放TNF-α和NO。Western blot結(jié)果顯示,β-葡聚糖作用于小鼠巨噬細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)MAPK通路ERK1/2和ERK5發(fā)生酪氨酸磷酸化,都參與到細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)中。 以上結(jié)果顯示:β-葡聚糖對小鼠巨噬細(xì)胞的增殖和吞噬的作用均呈雙相性;100μg/ml的β-葡聚糖激活巨噬細(xì)胞釋放NO和TNF-α的活性較強(qiáng);β-葡聚糖使胞內(nèi)MAPK信號通路中的ERK5和ERK1/2發(fā)生酪氨酸磷酸化;ERK1/2通路不是β-葡聚糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞生成TNF-α和NO的主要通路。這是β-葡聚糖在體外引起巨噬細(xì)胞免疫活性增強(qiáng)的重要細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)機(jī)制之一。
[Abstract]:Beta glucan is the most abundant polysaccharide in the cell wall of fungi. It is also the most stable part in the cell wall structure of fungi, which can trigger phagocytosis, release cytokines and a series of natural immune responses. As a polysaccharide component of cell wall, it has many biological and immunological pharmacological effects, and has become a hot spot in many fields. The whole animal experiment shows that beta glucan has immunomodulatory effect, which can promote various immune active factors secreted by immune function cells in animals, and then through these factors mediate the whole immune system function.
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1344057