發(fā)布時間：2017-12-27 13:08

  本文關(guān)鍵詞：初免加強免疫增強肺炎鏈球菌表面黏附素（psaA）核酸疫苗免疫原性研究　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 肺炎鏈球菌 表面黏附素 核酸疫苗 初免-加強免疫策略 免疫原性

【摘要】： 肺炎鏈球菌是導(dǎo)致細菌性肺炎、菌血癥、腦膜炎等侵襲性疾病的重要原因,同時也是導(dǎo)致急性中耳炎和鼻竇炎的主要病原菌。由于抗生素的廣泛運用,已導(dǎo)致多種耐藥菌的產(chǎn)生。已經(jīng)用于臨床的預(yù)防疫苗主要為23價多糖疫苗和7價多糖蛋白結(jié)合疫苗,但前者是T細胞非依賴性抗原,對免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善的2歲以下嬰幼兒以及老年人的保護性有限;后者包含的血清型有限,而且生產(chǎn)成本高,不適合在我國大范圍應(yīng)用。 PsaA是肺炎鏈球菌毒力因子之一,屬于金屬結(jié)合脂蛋白家族成員,分子量為37-kDa,有309個氨基酸殘基構(gòu)成,其氨基酸序列和免疫原性高度保守,屬于ABC-型轉(zhuǎn)運蛋白,PsaA在ABC型轉(zhuǎn)運體系中屬于細胞膜外蛋白質(zhì),一項功能是負責結(jié)合金屬錳離子和鋅離子;另一項功能是肺炎鏈球菌的一種黏附素。 本研究根據(jù)基因庫中肺炎鏈球菌表面黏附素的基因序列(序列號U53509),設(shè)計引物,運用PCR法從肺炎鏈球菌基因組中克隆出psaA基因,回收PCR產(chǎn)物并對其進行酶切,將其分別插入到pVAX1真核表達載體和pET28a原核表達載體,分別構(gòu)建出表達PsaA的核酸疫苗pVAX1-psaA及其重組原核表達載體pET28a-psaA,并對它們進行鑒定。將pET28a-psaA轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)ITPG誘導(dǎo),采用鎳柱親和層析法純化PsaA蛋白,Western-blot分析其抗原性。 10只BALB/c小鼠隨機分為實驗組和對照組,將構(gòu)建正確的核酸疫苗pVAX1-psaA對BALB/c小鼠(n=5)進行3次核酸疫苗免疫,隔周免疫一次,共3次,為初免,第三次免疫2周后,腹腔免疫50μg重組PsaA純化蛋白。對照組僅隔周免疫3針100μg pVAX1空載體,加強免疫50μl生理鹽水。所有動物分別于0、2、4、6、7周尾靜脈取血,間接ELISA法測定其抗PsaA抗體水平。 本實驗結(jié)果表明我們成功克隆出psaA基因并實現(xiàn)其亞克隆;所構(gòu)建的psaA核酸疫苗序列正確,同時成功實現(xiàn)了PsaA蛋白純化;動物實驗結(jié)果表明核酸疫苗初免后蛋白加強組的抗PsaA抗體滴度明顯高于其他組別(P＜0.01)。 采用核酸疫苗初免-蛋白加強免疫策略能顯著增強肺炎鏈球菌psaA核酸疫苗的免疫原性,為研制開發(fā)用于臨床的肺炎球菌核酸疫苗奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Streptococcus pneumoniae is an important cause of invasive diseases such as bacterial pneumonia, bacteremia and meningitis. It is also the main pathogen causing acute otitis media and sinusitis. The widespread use of antibiotics has led to a variety of drug-resistant bacteria. Has been used for clinical preventive vaccine for 23 valent polysaccharide vaccine and 7 valent polysaccharide conjugated vaccine, but the former is T cell dependent antigen, on the immune system of immature infants under 2 years old and the elderly protection Co.; the latter includes the serotype is limited, and the production cost is high, not suitable for in a wide range of application in china.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R392

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 馬千里;張巧;李琦;姚偉;王長征;;肺炎鏈球菌疫苗候選抗原PspA異家族亞類間交叉反應(yīng)評價[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2009年07期

2 吳瑜霞;龔蘭;陳振宇;楊秀華;楊英為;;多項指標聯(lián)合檢測對糖尿病早期腎損害的診斷價值[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2010年12期

3 杜婧;張悅;魏楓;薛曄霞;;糖尿病腎損害的評價指標[J];中國醫(yī)藥指南;2014年13期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 馬千里;肺炎鏈球菌毒力蛋白基因工程疫苗優(yōu)勢抗原篩選[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

，

本文編號：1341824