本文關鍵詞：LMP-1基因慢病毒重組體對大鼠骨髓間充質干細胞的增殖影響及其表達　出處：《山西醫(yī)科大學》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的：LMP-1重組慢病毒載體體外轉染大鼠骨髓間充質干細胞（BMSCs），，并檢測LMP-1基因對BMSCs增殖能力的影響和表達。 方法：選擇4周齡SD大鼠六只（不限雌雄），在無菌條件下提取骨髓間充質干細胞并培養(yǎng)至第三代。設立空白對照組、慢病毒載體轉染組和重組基因轉染組進行轉染（空白對照組為未經(jīng)特殊處理只有第三代骨髓間充質干細胞，慢病毒載體轉染組只在未經(jīng)特殊處理的第三代骨髓間充質干細胞中加入PGC-FU-GFP及轉染試劑Polybrene，重組基因轉染組只在未經(jīng)特殊處理的第三代骨髓間充質干細胞中加入PGC-FU-LMP-1-GFP及轉染試劑Polybrene）。轉染過48h后，經(jīng)倒置顯微鏡來觀察細胞熒光表達情況；流式檢測基因重組體轉染的效率；Western Blot檢測基因轉染后的表達情況；M T T評估基因重組體轉染對骨髓間充質干細胞增殖影響。 結果：1.成功的培養(yǎng)了第三代BMSCs，以100的感染復數(shù)（MOI）轉染，48小時后免疫熒光顯微鏡下觀察可見大量綠色熒光蛋白表達，經(jīng)檢測轉染效率可達67%；2.不同時間點慢病毒載體轉染組和重組基因轉染組，相對于空白對照組細胞增殖無顯著性差異（第一天：F=1.151，P=0.083；第三天：F=1.122，P=0.092；第五天：F=0.732，P=0.121；第七天：F=0,424，P=0.502）。3. Western Blot測得基因重組轉染組在72kDa處有特征帶，與LMP-1基因融合蛋白（~50KDa+28KDa＝78KDa）基本吻合。 結論：證實了經(jīng)LMP-1基因慢病毒重組體轉染大鼠骨髓間充質干細胞對其增殖活力沒有影響并可有效表達LMP-1。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

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本文編號：1328048