本文關(guān)鍵詞：Claudin-7可誘導性條件性基因敲除小鼠模型的構(gòu)建和鑒定　出處：《世界華人消化雜志》2015年31期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 緊密連接蛋白 Claudin- 誘導性條件性基因敲除 Cre/Loxp 腫瘤

【摘要】：目的:應用Cre-Loxp系統(tǒng)構(gòu)建Claudin-7蛋白在腸道可誘導性條件性基因敲除小鼠模型,并進行表型分析.方法:構(gòu)建Claudin-7打靶載體,通過電擊法轉(zhuǎn)染入小鼠胚胎干細胞(ES細胞),用正負篩選法篩選陽性ES細胞并進行PCR鑒定和Southern鑒定,利用顯微注射把發(fā)生正確同源重組的ES細胞注射進C57BL/6N小鼠囊胚,移入受體小鼠子宮以獲得嵌合體小鼠.將得到的嵌合體小鼠與C57BL/6N小鼠交配獲得Claudin-7-flox小鼠,該小鼠與PvillinCre ERT2轉(zhuǎn)基因小鼠雜交,通過子代自交獲得Claudin-7在腸道可誘導性條件性基因敲除(Cldn7fl/fl Villin-Cre ERT2)的小鼠,他莫昔芬(tamoxifen)藥物誘導腸道Claudin-7基因敲除,對小鼠進行表型分析.結(jié)果:獲得Claudin-7-flox小鼠及Claudin-7腸道可誘導性條件性基因敲除小鼠數(shù)只,Claudin-7腸道可誘導性條件性基因敲除小鼠出生時表型正常,發(fā)育良好,他莫昔芬(tamoxifen)藥物應用后,誘導了小鼠腸道上皮細胞Claudin-7基因表達的缺失.小鼠出現(xiàn)脫水表現(xiàn),活潑度降低,并出現(xiàn)死亡.結(jié)論:成功構(gòu)建了Claudin-7腸道可誘導性條件性基因敲除小鼠模型,利用他莫昔芬誘導腸道Claudin-7基因敲除,初步構(gòu)建了腸道炎癥模型,為進一步研究Claudin-7在腸道腫瘤中的作用奠定了基礎(chǔ).
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學附屬北京世紀壇醫(yī)院腫瘤中心;
【基金】：國家自然科學基金面上資助項目,No.81372585 北京市教育委員會科技計劃基金面上資助項目,No.KM201410025026 2014年北京市留學人員科技活動擇優(yōu)資助優(yōu)秀類項目~~
【分類號】：R-332
【正文快照】： 核心提示:為研究Claudin-7基因在腸道腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的分子生物學作用,本研究設(shè)計基于同源重組理論,利用ES細胞打靶以及顯微注射技術(shù),構(gòu)建了Claudin-7基因在腸道中可誘導條件性敲除的小鼠模型,為體內(nèi)研究Claudin-7的抑瘤功能奠定了堅實基礎(chǔ).李騰雁,王曉楠,李文晶,高宏,丁磊.

【參考文獻】

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本文編號：1325360